胎盤BDNF/TrkBシグナルを介した胎児脳発達のモニタリング機構

胎盘BDNF/TrkB信号监测胎儿大脑发育的机制

基本信息

批准号：
21K07828
负责人：
後藤優美子
金额：
$ 2.41万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、「胎盤におけるBDNF/TrkBシグナルを介した母児間のクロストーク、すなわち胎盤のBDNF/TrkBシグナルを介した胎児脳の発達レベルのモニタリング機構について明らかにすること」を目的とする。2022年度は、胎盤に発現するTrkBスプライシングバリアント解析結果について報告した。胎児発育不全症例では妊娠週数が早い24 週の症例でTrkB の全てのexonのmRNA発現が認められ，週数が進むにつれて発現が低下する傾向が見られた。BDNFについては重症SGA群においては軽症SGA群と比較して有意に高かった。しかし正常発育例との比較では低い傾向があるものの有意差はなかった。また胎児発育に関わらず多くの症例においてIG like ドメインは発現していた。これらの結果は、既知の主要なTrkBアイソフォームではなく、さらに異なるアイソフォームの存在を暗示していた。また、これらのmRNA発現が必ずしもタンパク質の発現を反映しないことから、免疫組織化学およびリアルタイムPCRの結果をもとに、T1, T-Shc, full lengthに加えて他のアイソフォームのTrkBの識別をタンパク質レベルで行う必要性が明らかになったため、これらのモノクローナル抗体作成に着手した。TrkBの各アイソフォーム遺伝子コンストラクトをもとにHEK293あるいはA20のそれぞれの培養細胞系に各アイソフォームを発現させ、BALB/cマウスに免疫を行った。また、母子境界におけるBDNF/TrkB発現がプロゲステロンおよびグルココルチコイドに大きく影響を受けることから、両ステロイドの妊娠免疫調節との関連性および免疫調節におけるプロゲステロンのグルココルチコイドに対する優位性を明らかにし、国際誌に発表した。

这项研究旨在“找到通过胎盘中BDNF/TRKB信号监测胎儿脑发育水平的机制”，即胎儿大脑中的BDNF/TRKB信号。在2022年，我们报告了分析胎盘中表达的TRKB剪接变体的结果。在胎儿发育发育的情况下，在妊娠24周的情况下观察到所有TRKB的所有外显子的mRNA表达，并且随着周的进展，该表达往往会降低。与轻度SGA组相比，严重的SGA组的BDNF明显更高。但是，尽管与正常发育案例相比，趋势较低，但没有显着差异。此外，无论胎儿发育如何，在许多情况下都表达了类似Ig的结构域。这些结果暗示存在甚至不同的同工型，而不是主要已知的TRKB同工型。此外，由于这些mRNA表达并不一定反映蛋白质表达，基于免疫组织化学和实时PCR结果，因此很明显，除了在蛋白质水平上除了T1，T-SHC和全长外，还需要区分TRKB，因此我们开始创建这些单次隆抗体。基于每个TRKB的同工型基因构建体，每个同工型在HEK293或A20的培养细胞系中表达，BALB/C小鼠被免疫。此外，由于母子边界上的BDNF/TRKB表达受到孕酮和糖皮质激素的严重影响，因此孕激素与糖皮质激素相对于免疫调节中糖皮质激素的优势之间的关联显示，揭示了孕酮比糖皮质激素在不合情关节中的影响。