肝臓の慢性疾患におけるインターロイキン‐１９による新規免疫連関の解明

阐明白细胞介素 19 在慢性肝病中的新型免疫联系

• 批准号: 18J23232
• 负责人: 藤本 泰之
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J23232/
• 关键词: IL-19; 急性肝障害; 肝炎

今年度では、野生型（ＷＴ）およびIL-19遺伝子欠損マウス（IL-19KO）において病態形成に差が認められたLPS/D-galactosamine(GalN)誘発性急性肝障害モデルにおけるIL-19の機能をさらに詳細に検討するため、肝臓組織を病理組織学的に評価するとともに、定量リアルタイムRT-PCR(qRT-PCR)を用いて肝障害に関与する各種炎症関連因子の発現量を比較検討した。C57BL/6背景のWTおよびIL-19KOに生理食塩水に希釈したLPS (5 μg/mL)およびGalN（700 mg/kg）を腹腔内投与することで、急性肝障害モデルを誘導した。投与後6および8時間後に肝臓を採材した。採材した肝臓組織からRNAを抽出し、逆転写反応によりcDNAを調製した。調製したcDNAはqRT-PCRに供した。さらに採材した肝臓組織を中性緩衝ホルマリン用液に固定し、その後パラフィン包埋を行った。包埋した組織を用いてHE染色を行い、急性肝障害による肝臓組織の病変を病理学的に評価した。LPS/GalN 投与後6および8時間の肝臓組織では、いずれのタイムポイントにおいても、WTはLPS/GalN非投与群である対照群と比較して肝細胞死および好中球をはじめとする炎症性細胞の浸潤が認められた。次に、IL-19KOではWTと比較して肝障害が増悪化しており、肝細胞死の増加、顕著な出血性病変および好中球等の炎症性細胞浸潤の増加が認められた。さらにLPS/GalN投与8時間におけるWTおよびIL-19KOの肝臓組織における炎症性ケモカイン（CCL2およびCCL5）のmRNA発現量をqRT-PCRにより比較検討した。その結果、肝障害を誘導したIL-19KOでは、WTと比較してCCL2およびCCL5ともにmRNA発現量が有意に増加していることを見いだした。

今年，我们将重点关注IL-19在LPS/D-氨基半乳糖（GalN）诱导的急性肝损伤模型中的功能，在该模型中观察到野生型（WT）和IL-19基因之间发病机制的差异。为了更详细地检查这一点，对肝脏组织进行了组织病理学评估，并使用定量实时 RT-PCR (qRT-PCR) 来比较所涉及的各种炎症相关因子的表达水平。在肝损伤中。在 C57BL/6 背景上腹腔注射用盐水稀释至 WT 和 IL-19KO 的 LPS (5 μg/mL) 和 GalN (700 mg/kg) 诱导急性肝损伤模型。给药后6和8小时收获肝脏。从收集的肝组织中提取RNA，并通过逆转录反应制备cDNA。将制备的cDNA进行qRT-PCR。此外，将收集的肝组织固定在中性缓冲福尔马林溶液中，然后包埋在石蜡中。使用包埋组织进行HE染色，对急性肝损伤引起的肝组织病变进行病理学评估。在 LPS/GalN 给药后 6 小时和 8 小时的肝组织中，与非 LPS/GalN 对照组相比，WT 在两个时间点都显示出更高的肝细胞死亡和包括中性粒细胞的炎症活性。其次，与WT相比，IL-19KO的肝损伤加剧，肝细胞死亡增加，出血性病变明显，中性粒细胞等炎症细胞浸润增加。此外，我们通过 qRT-PCR 比较了 LPS/GalN 给药后 8 小时 WT 和 IL-19KO 肝组织中炎症趋化因子（CCL2 和 CCL5）的 mRNA 表达水平。结果，我们发现在诱导肝损伤的IL-19KO中，CCL2和CCL5的mRNA表达水平与WT相比显着增加。