神経膠腫細胞浸潤におけるArf6依存性および非依存性の意義

Arf6依赖性和独立性在胶质瘤细胞侵袭中的意义

基本信息

批准号：
21659341
负责人：
田中潤也
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究おいては、まず神経膠腫浸潤におけるArf6の関与、および異なる神経膠腫細胞間におけるその普遍性について査定することを第一義としていた。調べた限りにおいてArf6を高発現する神経膠腫細胞はC6細胞のみであったが、本細胞におけるArf6ノックダウン下にて浸潤性が減少したことより、たしかにArf6の寄与は認められた。しかしながらその効果は50%程度であり、Arf6が浸潤性に関する主たる責任因子と考えることに疑義を生む結果となった。一方Arf6発現が低いSF268細胞中のArf6 mRNAよりcDNAをクローニングして活性に影響する変異がないか検討したが、そのような変異は観察されなかった。こうしたことから神経膠腫細胞浸潤においては、Arf6高発現細胞においてもArf6の寄与は限定的であり、一方Arf6低発現細胞においてはArf6の寄与はさらに小さいと考えられた。そこで、浸潤様式の異なる複数の神経膠腫細胞において共通に浸潤性に寄与する因子の検索へと移り、検索の結果、ナトリウムイオン/プロトン交換輸送体1(NHE1)を有力な当該因子として見出した。これまでに以下の知見を得ている。1.NHE1は浸潤様式の異なる神経膠腫細胞群において共通に発現亢進している(mRNA,タンパク質いずれのレベルにおいても)2.NHE1ノックダウンによって、浸潤性は90%以上の効率で抑制される3.NHE1阻害剤により浸潤様式の異なるいずれの神経膠腫細胞の浸潤も抑制される4.NHE1阻害剤はNHE1の細胞内局在を変動させ、かつアクチン細胞骨格の再構成を阻害しており、このことが細胞運動性を減弱させたことが浸潤性の抑制に作用したと考えられた。これらの結果は、NHE1阻害剤が、浸潤様式の異なる様々の神経膠腫に対して普遍的な浸潤抑制剤たる可能性を示唆しており、当該領域において大変重要な知見であると考えられる。これらのin vitroの成績はすでに特許申請を完了しており、現在論文として発表する準備を行なっている。またin vivoでの有効性についての検討に入っている。

本研究的主要目的是评估 Arf6 在神经胶质瘤侵袭中的参与及其在不同神经胶质瘤细胞中的普遍性。据我们研究，C6细胞是唯一高度表达Arf6的神经胶质瘤细胞，但Arf6的贡献肯定得到了认可，因为这些细胞的侵袭性在Arf6敲除下降低。然而，效果仅为 50% 左右，令人怀疑 Arf6 是否是侵袭性的主要因素。另一方面，我们从Arf6表达较低的SF268细胞中克隆了Arf6 mRNA的cDNA，并检查是否存在影响活性的突变，但没有观察到此类突变。这些结果表明，在神经胶质瘤细胞侵袭中，即使在高表达Arf6的细胞中，Arf6的贡献也是有限的，而在低表达Arf6的细胞中，Arf6的贡献甚至更小。因此，我们开始寻找通常有助于不同侵袭模式的多种神经胶质瘤细胞的侵袭性的因素，并且作为我们研究的结果，我们发现钠离子/质子交换转运蛋白1（NHE1）是一个可能的因素。到目前为止，我们已经获得了以下知识。 1.NHE1 在不同侵袭模式的胶质瘤细胞组中普遍上调（mRNA 和蛋白质水平） 2.NHE1 敲低抑制侵袭性的效率超过 90% 3.NHE1 抑制剂的浸润4.NHE1抑制剂改变NHE1的细胞内定位并抑制肌动蛋白细胞骨架的重组，从而抑制细胞运动。人们认为浸润效应的减弱抑制了侵袭性。这些结果表明NHE1抑制剂可能是针对不同侵袭模式的各种胶质瘤的通用侵袭抑制剂，并被认为是该领域非常重要的发现。我们已经为这些体外结果申请了专利，目前正准备将其作为论文发表。我们目前还在研究其体内有效性。