抗腫瘍細胞活性を有す海洋無脊椎動物レクチンの分子細胞生物学

具有抗肿瘤细胞活性的海洋无脊椎动物凝集素的分子细胞生物学

• 批准号: 16J07090
• 负责人: 小出 康裕
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J07090/
• 关键词: レクチン; ガラクトース; ムラサキイガイ; イソゴカイ; MytiLec; 薄層クロマトグラフィー(TLC); スフィンゴ糖脂質; ファーイースタンブロッティング; SUELファミリー; 自然免疫; Gb3; MytiLec-1; レクチン; ガラクトース; ムラサキイガイ; イソゴカイ; MytiLec; 薄層クロマトグラフィー(TLC); スフィンゴ糖脂質; ファーイースタンブロッティング; SUELファミリー; 自然免疫; Gb3; MytiLec-1

海棲無脊椎動物由来のガラクトシド結合性レクチンの役割を明らかにする目的から、軟体動物二枚貝ムラサキイガイと環形動物イソゴカイから得たレクチンに対する抗体を作り、組織内の局在を免疫組織化学的に明らかにした。ムラサキイガイレクチンは、鰓や外套膜で高いシグナルを示すことが判明した。これは2016年に報じた、微生物の暴露によりMytiLecのmRNAが鰓や外套膜で高く転写される結果を支持した。イソゴカイから得たレクチンは、表皮と腸に高いシグナルを有することが判明した。それぞれの組織を部位別に分け、ハプテン糖を含む緩衝液で溶出した上清を電気泳動し、それぞれの抗レクチン抗体を用いて検出すると、どちらのレクチンも、組織の細胞が有するガラクトース糖鎖に結合して存在していることが認められた。これにより海棲無脊椎動物レクチンは、その存在様式として、リガンド糖鎖に結合せず遊離状態で存在するもの(カイメンレクチン、ウニ卵レクチン、ウミシダレクチン)と、リガンドに結合して存在するもの(ムラサキイガイレクチン、イソゴカイレクチン、スガイレクチン)に分類できることが判明した。糖鎖アレイを用い、ムラサキイガイレクチンはαガラクトースに、イソゴカイレクチンはβガラクトースに特異的に結合することが判明した。エラと外套膜から得られた抽出残渣を有機溶媒で抽出し、薄層クロマトグラフィー(TLC)を用いてムラサキイガイの糖脂質を分離できた。その中にはガラクトースを含む中性糖鎖を持つスフィンゴ糖脂質が存在することの示唆が、抗体を用いた解析から得られた。その後、TLCにより分離した糖脂質を疎水性膜に転写するファーイースタンブロッティングの手法を改良した。そして標識レクチンや抗体を用いた検出技術の向上を行ない、ムラサキイガイの組織中に含まれる、レクチンの内在性リガンド糖脂質の同定を継続している。

为了阐明来自海洋无脊椎动物的半乳糖苷结合凝集素的作用，制备了与从软体动物双壳类动物和环状麻雀获得的凝集素的抗体，并且在组织内的定位在组织中进行了免疫组织化学的定位。发现穆拉萨基贻贝凝集素在g和地幔中显示出很高的信号。这支持了2016年的一份报告，即微生物的暴露导致g和地幔中Mytilec mRNA的高转录。发现从糖浆获得的凝集素在表皮和肠中具有高信号。当将组织分为不同的位点时，用每种抗凝集素抗体将用含有纯糖的缓冲液进行洗脱的上清液，并检测到两个凝集素都存在于组织细胞中的结合和半乳糖糖链中。这表明可以将海洋无脊椎动物凝集素分类为不结合配体糖链的海洋无脊椎动物凝集素，并且存在于自由状态（蜘蛛凝集素，海胆蛋白凝集素，肾凝集素），以及与配体结合的糖（紫色肌肉伸肌，蜘蛛蛋白，蜘蛛网凝集素和sugairectin和sugairectin）。使用糖基化阵列，发现贻贝凝集素特异性与α-半乳糖结合，异体糖凝集素特异性与β-半乳糖结合。用有机溶剂提取从g和地幔获得的提取的残留物，可以使用薄层色谱法（TLC）分离来自贻贝的糖脂。在这些糖基化中存在含有半乳糖的糖磷脂脂的建议。之后，将远东印迹的方法转移到疏水性膜上，其中远东印迹的方法得到了改善。该公司还使用标记的凝集素和抗体改进了其检测技术，并继续鉴定贻贝组织中包含的凝集素的内源性配体糖脂。