宿主ゲノム内に見つかったフィロウイルス遺伝子の機能解析

宿主基因组中发现的丝状病毒基因的功能分析

• 批准号: 16J04404
• 负责人: 近藤 達成
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J04404/
• 关键词: 内在性フィロウイルス様因子; フィロウイルス; エボラウイルス; マールブルグウイルス; コウモリ; mlEFL35; エボラウイルスVP35; 非レトロウイルス由来の内在性遺伝子; 内在性遺伝子

報告されているフィロウイルス由来と考えられるゲノム配列のうち、トビイロホオヒゲコウモリ（Myotis lucifugus）のゲノム上に見つかったエボラウイルスVP35遺伝子に相同性が高 く、且つ、オープンリーディングフレームが保存されている領域（mlEFL35）を人工合成した。mlEFL35由来の蛋白質(mlEFL35p)を哺乳類由来培養細胞に強制発現 させる系を確立し、発現した蛋白質の機能解析を行った。mlEFL35pはフィロウイルスのVP35同様にIFN応答阻害活性を有した。一方で、mlEFL35pは、ウイルスゲノ ムの複製に重要なウイルスポリメラーゼコファクターとしての機能は持たないことが分かった。また、VP35を共発現させた細胞を用いた免疫沈降法の結果から、 mlEFL35pは多量体を形成すること及びエボラウイルスのVP35とも相互作用することが示唆された。トビイロホオヒゲコウモリに近縁なコウモリ（Myotis myotis）の培養細胞を用いて、EFL35の転写および発現等を調べた。Myotis myotisのゲノムにもEFL35が存在することを確認し全長の塩基配列を確定したが、残念ながら通常培養条件下でのEFL35の転写等は確認できなかった。しかし、EFL上流の配列を精査したところ、遺伝子の転写に関与するゲノム配列と類似性が高い領域を見つけたので、ある特定条件下でEFL35の転写等が起こると仮定した実験をおこなった。現在、次世代シークエンサーを用いたトランスクリプトーム解析を行っている最中である。

在被认为是源自丝状病毒的基因组序列中，人为合成了开放阅读框的区域（mlefl35）（mlefl35）。建立了一个系统以强行表达培养的哺乳动物细胞中MLEFL35衍生的蛋白（MLEFL35p），并对表达蛋白进行功能分析。 MLEFL35p具有类似于Phylovirus VP35的IFN反应抑制活性。另一方面，发现mlefl35p不充当病毒聚合酶辅助因子，这对于病毒基因组复制很重要。此外，使用共表达VP35细胞的免疫沉淀表明MLEFL35p形成了多聚体，并与埃博拉病毒VP35相互作用。使用蝙蝠的培养细胞（Myotis myotis）检查了EFL35的转录和表达，这些细胞与白尾胡子蝙蝠密切相关。还证实了Myotis myotis基因组中EFL35的存在，并确认了全长核苷酸序列，但不幸的是，在正常培养条件下的EFL35转录尚未得到证实。但是，在密切检查了EFL上游的序列之后，我们发现一个与基因转录涉及的基因组序列高相似的区域，我们进行了一个实验，该实验假设在某些特定条件下发生EFL35的转录。当前，正在使用下一代序列仪进行转录组分析。

项目成果

宿主ゲノムに見つかった内在性フィロウイルス様配列の網羅的解析

宿主基因组中发现的内源丝状病毒样序列的综合分析

• 发表时间: 2019
• 作者: Kondoh Tatsunari;Manzoor Rashid;Nao Naganori;Maruyama Junki;Furuyama Wakako;Miyamoto Hiroko;Shigeno Asako;Kuroda Makoto;Matsuno Keita;Fujikura Daisuke;Kajihara Masahiro;Yoshida Reiko;Igarashi Manabu;Takada Ayato;近藤達成
• 通讯作者: 近藤達成

ヒトNPC1の多型はフィロウイルスに対する感受性を左右するか？

人类 NPC1 多态性是否会影响对丝状病毒的敏感性？

• 发表时间: 2017
• 作者: Kondoh Tatsunari;Manzoor Rashid;Nao Naganori;Maruyama Junki;Furuyama Wakako;Miyamoto Hiroko;Shigeno Asako;Kuroda Makoto;Matsuno Keita;Fujikura Daisuke;Kajihara Masahiro;Yoshida Reiko;Igarashi Manabu;Takada Ayato;近藤達成;近藤達成;近藤達成
• 通讯作者: 近藤達成

Single-Nucleotide Polymorphisms in Human NPC1 Influence Filovirus Entry Into Cells

• DOI: 10.1093/infdis/jiy248
• 发表时间: 2018-12-15
• 期刊: JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES
• 影响因子: 6.4
• 作者: Kondoh, Tatsunari;Letko, Michael;Takada, Ayato
• 通讯作者: Takada, Ayato

Functional analyses of endogenous ebolavirus VP35-like element

内源性埃博拉病毒VP35样元件的功能分析

• 发表时间: 2017
• 作者: Kondoh Tatsunari;Manzoor Rashid;Nao Naganori;Maruyama Junki;Furuyama Wakako;Miyamoto Hiroko;Shigeno Asako;Kuroda Makoto;Matsuno Keita;Fujikura Daisuke;Kajihara Masahiro;Yoshida Reiko;Igarashi Manabu;Takada Ayato;近藤達成;近藤達成;近藤達成;Tatsunari KONDOH;Tatsunari KONDOH
• 通讯作者: Tatsunari KONDOH

Functional analyses of mlEEL35

mlEEL35 的功能分析

• 发表时间: 2017
• 作者: Kondoh Tatsunari;Manzoor Rashid;Nao Naganori;Maruyama Junki;Furuyama Wakako;Miyamoto Hiroko;Shigeno Asako;Kuroda Makoto;Matsuno Keita;Fujikura Daisuke;Kajihara Masahiro;Yoshida Reiko;Igarashi Manabu;Takada Ayato;近藤達成;近藤達成;近藤達成;Tatsunari KONDOH
• 通讯作者: Tatsunari KONDOH