転写因子Pit-1による下垂体ホルモンの組織特異的発現制御機構の解明

转录因子 Pit-1 阐明垂体激素的组织特异性表达控制机制

基本信息

批准号：
09J05209
负责人：
谷内秀輔
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

Pit-1wの転写活性化能を明らかにするため,マウスPit-1w発現ベクターを作製し,成長ホルモン(GH),プロラクチン(PRL),甲状腺刺激ホルモンβサブユニット(TSHβ)遺伝子のプロモーターの転写活性に与える影響をHEK293細胞においてレポーター解析により調べた。その結果,Pit-1wはPRLのプロモーターの転写活性を有意に増加させたが,その増加率はPit-1αと比較して低かった。一方,Pit-1wはGHおよびTSHβのプロモーターの転写活性を増加させなかった。これらの結果は,ニワトリPit-1w発現ベクターを用いたレポーター解析の結果と一致しており,Pit-1wの機能は鳥類と哺乳類の間で共通であると考えられた。精巣におけるPit-1wの生理的機能を明らかにするため,1,2,3,4,5,6,8,10週齢のICR系統マウスの精巣においてGH,PRL,TSHβのmRNA発現とPit-1wのmRNAおよびタンパク発現との相関を調べた。GHおよびTSHβの発現はPit-1wの発現パターンとの相関が見られなかった。PRLの発現は1,2週齢では低く,3週齢以降に急上昇するというPit-1wと同様の発現パターンを示した。Pit-1mRNA発現細胞を同定するために,8週齢のICR系統マウスの精巣においてin situ hybridization法を行ったところ,一部の精原細胞および全ての精母細胞,精子細胞において陽性シグナルが検出され,特に精母細胞で強い陽性シグナルが得られた。精母細胞および精子細胞は2週齢から3週齢の間に増加することが知られており,その時期はPit-1w mRNAの発現が急上昇する時期と一致する。以上のことから,マウスの精巣においてPit-1wはPRLの発現を制御するとともに精母細胞への分化以降の精子形成に関与する可能性が示唆された。

为了阐明Pit-1w的转录激活能力，我们构建了小鼠Pit-1w表达载体，并激活了生长激素（GH）、催乳素（PRL）和促甲状腺激素β亚基（TSHβ）启动子的转录激活) 基因对病毒作用的影响通过 HEK293 细胞中的报告基因分析进行了研究。结果表明，Pit-1w显着增加了PRL启动子的转录活性，但增加幅度低于Pit-1α。同时，Pit-1w并没有增加GH和TSHβ启动子的转录活性。这些结果与使用鸡Pit-1w表达载体进行报告分析的结果一致，表明Pit-1w的功能在鸟类和哺乳动物之间是共有的。为了阐明Pit-1w在睾丸中的生理功能，我们检测了GH、PRL、TSHβ和Pit-1w mRNA的表达量，并探讨了Pit-1w mRNA与蛋白表达量的相关性。 GH和TSHβ的表达与Pit-1w的表达模式之间没有相关性。 PRL在1、2周龄时表达量较低，3周龄后迅速升高，表现出与Pit-1w相似的表达模式。为了鉴定表达Pit-1 mRNA的细胞，对8周龄ICR小鼠的睾丸进行了原位杂交，在部分精原细胞、所有精母细胞和精细胞中均检测到阳性信号，尤其获得了强阳性信号。在精母细胞中。已知精母细胞和精细胞在2周龄至3周龄期间增加，这一时期恰逢Pit-1w mRNA表达快速增加的时期。这些结果表明Pit-1w调节小鼠睾丸中PRL的表达，并可能参与分化为精母细胞后的精子发生。