慢性疼痛発症における脊髄内グリア細胞の活性化メカニズムおよびその役割に関する研究

椎管内胶质细胞激活机制及其在慢性疼痛发生发展中的作用研究

基本信息

批准号：
09J01532
负责人：
前田早苗
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

末梢組織の免疫担当細胞であるマクロファージや好中球におけるTRPM2の役割を検討するため、TRPM2+/+マウスとしてGFPトランスジェニックマウスを用い、TRPM2-KOマウスに対してマクロファージ特異的にTRPM2をノックインした脊髄キメラマウスを作製した。今後はこのキメラマウスとTRPM2-KOマウスを用いて、炎症性および神経障害性疼痛モデルにおけるマクロファージのTRPM2の機能を解析する予定である。また、慢性疼痛における脊髄内グリア細胞の活性化に注目し、臨床で慢性疼痛の治療に使用されているモルヒネ、アミトリプチリンおよびトラマドールの脊髄内グリア細胞活性化に及ぼす影響について検討した。坐骨神経部分結紮処置の当日から、もしくは7日後から各薬物を反復投与したところ、アミトリプチリンおよびトラマドールは5日以上の反復投与で持続性のアロディニア改善作用を示した。結紮当日から7日後にかけて各薬物を投与し、脊髄後角におけるミクログリアおよびアストロサイトの活性化状態を免疫染色法により検討したところ、モルヒネは活性化の増強作用を、アミトリプチリンは活性化の抑制効果を示した。トラマドールはミクログリアにはほとんど影響を与えなかったが、アストロサイトの活性化抑制作用を示した。そこで、単離培養アストロサイトにTNF-a刺激を与えた際の炎症性サイトカインmRNAレベルをreal time RT-PCR法により検討したところ、アミトリプチリンおよびトラマドールはIL-1bの発現誘導を抑制した。したがって、アミトリプチリンおよびトラマドールの抗アロディニア作用は、脊髄内アストロサイトに対する活性化抑制作用と関連することが推察される。

为了研究TRPM2在巨噬细胞和中性粒细胞（外周组织中的免疫活性细胞）中的作用，我们使用GFP转基因小鼠作为TRPM2+/+小鼠，并在TRPM2-KO小鼠中使用巨噬细胞特异性敲除TRPM2的脊髓嵌合小鼠诞生了。未来，我们计划使用这种嵌合小鼠和TRPM2-KO小鼠来分析巨噬细胞TRPM2在炎症和神经病理性疼痛模型中的功能。我们还关注慢性疼痛中椎管内胶质细胞的激活，并研究了临床上用于治疗慢性疼痛的吗啡、阿米替林和曲马多对椎管内胶质细胞激活的影响。当从部分坐骨神经结扎当天或7天后重复施用每种药物时，当重复施用5天或更长时间时，阿米替林和曲马多显示出持续的异常性疼痛改善效果。从结扎当天到7天后施用每种药物，并使用免疫染色检查脊髓背角的小胶质细胞和星形胶质细胞的活化状态，吗啡具有增强活化的作用，而阿米替林具有抑制作用。激活显示。曲马多对小胶质细胞影响不大，但对星形胶质细胞活化有抑制作用。因此，当用 TNF-a 刺激分离培养的星形胶质细胞时，使用实时 RT-PCR 检查炎症细胞因子 mRNA 水平，阿米替林和曲马多抑制了 IL-1b 表达的诱导。因此，推测阿米替林和曲马多的抗异常性疼痛作用与其对椎管内星形胶质细胞的活化抑制作用有关。