多重機能集積化による高活性ナノワクチンシステムの構築とがん免疫治療への展開

多功能集成构建高活性纳米疫苗系统及其在癌症免疫治疗中的应用

基本信息

批准号：
15J12180
负责人：
能﨑優太
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

抗原キャリアのアジュバント機能を高めるために、Toll様受容体リガンド分子であるCpG-DNAをpH応答性高分子修飾リポソームに複合化させ、その複合化法が免疫誘導機能にどのような影響を与えるかを検討した。リポソーム作製時にCpG-DNA溶液を混合するPre-mix複合体とリポソームを予め作製してからCpG-DNA溶液を混合するPost-mix複合体を作製した。前年度までに、Post-mix複合体はPre-mix複合体よりもDCの共刺激分子(CD80)の発現を誘導する能力が高く、抗腫瘍効果も高いことを明らかにした。本年度はPost-mix複合体のDCへのCpG-DNAデリバリー機能を調べるために、Post-mix複合体をDCの培養液に加えてからの経過時間を変え、共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察した。Post-mix添加30分後からリポソームとCpG-DNAが同時に取り込まれているような画像が得られた。これはPost-mix法で複合体を調製した場合、CpG-DNAがリポソームと複合化していることを示唆する結果である。抗原キャリアにアジュバント機能を付与するもう一つの方法として、生理活性多糖を主鎖とするpH応答性高分子を用いて、抗原の細胞質送達機能とアジュバント作用を併せ持つ多機能性多糖を設計した。カードランは、DCの細胞膜表面に発現する受容体Dectin-1と相互作用してDCを活性化させることが知られている。そこで、カードランにpH応答性基を導入し、pH応答性カードラン誘導体を合成した。pH応答性カードラン誘導体修飾リポソームはDCの細胞質内に抗原をデリバリーし、マウスに皮下投与すると脾細胞から強い抗原特異的なIFN-γ産生がみられた。以上の諸成果は細胞性免疫を誘導するための抗原キャリアには細胞質内デリバリー機能とアジュバント機能を付与することが重要であることを示唆している。

为了增强抗原载体的辅助功能，将类似于Toll的受体配体分子CpG-DNA结合到pH响应性聚合物改性的脂质体，结合方法的结合方法对免疫诱导功能有效。预先制备脂质体和脂质体过程中混合CpG-DNA溶液的混合络合物，并准备好混合CpG-DNA溶液的混合后复合物。到上一年，分子后复合物比混合前复合物具有更高的诱导DC共刺激分子表达的能力（CD80），并且更有效。在今年，为了研究混合后复合物向DC的CPG-DNA传递功能，更改了将混合后复合物添加到DC培养基后经过的时间，并使用共聚焦激光显微镜观察到结果。在混合后加入30分钟后，获得了表明脂质体和CpG-DNA同时掺入的图像。该结果表明，当通过混合后方法制备复合物时，CpG-DNA与脂质体复合。作为将辅助功能传递给抗原载体的另一种方法，使用具有生理活性多糖的主链的pH响应性聚合物来设计多功能多糖，该多糖多糖结合了抗原和辅助作用的细胞质递送功能。已知Curdlan与受体Dectin-1相互作用，该受体Dectin-1在DC的细胞膜表面表达，并激活DC。因此，将pH响应组引入curdlan中，以合成pH响应的Cardlan衍生物。 pH响应性的Cardlan衍生物修饰的脂质体将抗原递送到DC的细胞质中，当皮下对小鼠皮下给药时，从脾细胞中观察到强抗原特异性IFN-γ的产生。以上结果表明，赋予胞质内递送和辅助功能至抗原载体以诱导细胞介导的免疫力很重要。