細胞運動およびアクチン動態制御におけるＰＣＴＫ３シグナル伝達機構の解明

阐明控制细胞运动和肌动蛋白动力学的 PCTK3 信号转导机制

• 批准号: 15J09973
• 负责人: 松田 真弥
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J09973/
• 关键词: Cell migration; actin cytoskeleton; Focal adhesion kinase; CDK; PCTK3; 細胞運動; 情報伝達; FAK1

PCTAIRE kinase 3 (PCTK3)はサイクリン依存性キナーゼファミリーに属するSer/Thrキナーゼであり、細胞運動の制御に関わることが示唆されている。しかしながら、その下流シグナル伝達機構に関する情報は極めて少なく、ほとんど解析が進んでいない。昨年度に、PCTK3がRhoA/ROCKシグナル及び、Focal adhesion kinase (FAK) Tyr-397のリン酸化を負に調節することを明らかにした。FAKは接着斑の形成において中心的な役割を担うことが知られている。そこで本年度は、PCTK3が接着斑形成に関与するか検証した。HEK293T細胞を用いて、免疫沈降によりpaxillinとFAKの相互作用を調べたところ、コントロール細胞ではFAKとpaxillinの相互作用は認められなかったのに対し、PCTK3をノックダウンした細胞では相互作用が顕著に増加していた。また、HEK293T細胞をfibronectin-coated dishに播種して30分置き、vinculinの細胞内局在を調べた。その結果、コントロール細胞では、vinculinは細胞質全体に局在していたが、PCTK3ノックダウン細胞では細胞膜辺縁で斑点状に局在し、リン酸化FAKとの共局在が多数観察された。一方で、HeLa細胞をfibronectin-coated dishに播種し、3時間後にpaxillinの局在を調べた結果、コントロール細胞と比べると、PCTK3 S12D変異体を過剰発現させた細胞では接着斑の数が減少し、細胞面積も縮小していた。以上の結果から、PCTK3は接着斑の形成を抑制することで、細胞運動を制御している可能性が考えられた。これまでの研究結果を論文にまとめ、英国雑誌Scientific Reportsに投稿し、査読を経て採択された。

PCTAIRE 激酶 3 (PCTK3) 是一种 Ser/Thr 激酶，属于细胞周期蛋白依赖性激酶家族，已被认为参与细胞运动的控制。然而，有关下游信号转导机制的信息极少，分析也进展甚微。去年，我们发现 PCTK3 负向调节 RhoA/ROCK 信号和粘着斑激酶 (FAK) Tyr-397 的磷酸化。众所周知，FAK 在粘着斑的形成中发挥着核心作用。因此，今年我们研究了PCTK3是否参与粘着斑形成。当我们使用 HEK293T 细胞通过免疫沉淀研究桩蛋白和 FAK 之间的相互作用时，我们发现在对照细胞中没有观察到 FAK 和桩蛋白之间的相互作用，而在 PCTK3 被敲低的细胞中观察到相互作用明显增加。另外，将HEK293T细胞接种到纤连蛋白包被的培养皿上，放置30分钟，检查纽蛋白的细胞内定位。结果，在对照细胞中，纽蛋白定位于整个细胞质，但在PCTK3敲低细胞中，纽蛋白定位于细胞膜边缘的斑点，并且观察到许多与磷酸化FAK的共定位。另一方面，当 HeLa 细胞接种在纤连蛋白包被的培养皿上并在 3 小时后检查桩蛋白的定位时，与对照细胞（细胞面积）相比，过表达 PCTK3 S12D 突变体的细胞中粘着斑的数量减少。也减少了。这些结果表明PCTK3可能通过抑制粘着斑的形成来控制细胞运动。迄今为止的研究结果总结在一篇论文中，提交给英国《科学报告》杂志，并经同行评审后接受。

项目成果

PCTK3/CDK18 regulates cell migration by negatively modulating the FAK1 activity

PCTK3/CDK18 通过负向调节 FAK1 活性来调节细胞迁移

• 发表时间: 2016
• 作者: Shinya Matsuda;Akihiko Tsuji;Keizo Yuasa
• 通讯作者: Keizo Yuasa

PCTK3/CDK18による細胞形態・運動の制御

PCTK3/CDK18 控制细胞形态和运动

• 发表时间: 2016
• 作者: Shinya Matsuda;Kohei Kawamoto;Kenji Miyamoto;Akihiko Tsuji;and Keizo Yuasa;松田真弥，川本晃平，澤本真菜，辻明彦，湯浅恵造
• 通讯作者: 松田真弥，川本晃平，澤本真菜，辻明彦，湯浅恵造

PCTK3/CDK18はFAK1を抑制して細胞形態を制御する

PCTK3/CDK18 抑制 FAK1 并控制细胞形态

• 发表时间: 2016
• 作者: Shinya Matsuda;Akihiko Tsuji;Keizo Yuasa;松田真弥
• 通讯作者: 松田真弥

CDK ファミリーメンバーPCTK3/CDK18 はcyclin A 及びPKA によって活性調節を受け， アクチン動態を制御する

CDK 家族成员 PCTK3/CDK18 受细胞周期蛋白 A 和 PKA 调节并控制肌动蛋白动力学。

• 发表时间: 2015
• 作者: Shinya Matsuda;Akihiko Tsuji;Keizo Yuasa;松田真弥;松田真弥，川本晃平，辻明彦，湯浅恵造;松田真弥
• 通讯作者: 松田真弥

サイクリン依存性キナーゼ PCTK3/CDK18 による細胞運動調節機構の解明

细胞周期蛋白依赖性激酶PCTK3/CDK18阐明细胞运动调节机制

• 发表时间: 2016
• 作者: Shinya Matsuda;Akihiko Tsuji;Keizo Yuasa;松田真弥;松田真弥，川本晃平，辻明彦，湯浅恵造
• 通讯作者: 松田真弥，川本晃平，辻明彦，湯浅恵造