がん抑制遺伝子産物TSLC1による膜輸送制御とその細胞増殖抑制への意義の解析

抑癌基因产物TSLC1对膜转运的调控及其抑制细胞生长的意义分析

基本信息

批准号：
20790072
负责人：
西谷直之
金额：
$ 2.41万
依托单位：
Iwate Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20790072/
关键词：
癌シグナル伝達細胞・組織発生・分化薬学細胞増殖

项目摘要

カドヘリンによる細胞間接着の低下はβカテニンの核内機能を亢進し、細胞のがん化に寄与する。申請者は膜輸送制御因子ARF GTPase activating proteln(ARF-GAP)の一つであるGIT1ががん抑制遺伝子産物TSLC1と複合体を形成することを見出した。本研究では、「TSLC1がカドヘリンの膜輸送を制御することによって、βカテニンによるがん化シグナルを抑制する」という仮説の検証を目的とし以下の実験を行った。1.TSLC1とGIT1による細胞増殖シグナルの抑制TSLC1とGIT1の変異体、遺伝子ノックダウン、阻害剤を用いて各因子の機能を制限したところ、TSLC1とカドヘリンの細胞表面への局在や細胞間接看の安定化にはARF-GAP活性が必要なことが明らかとなった。また、TSLC1のノックダウンによって、βカテニン/TCFによる転写活性が亢進することがルシフェラーゼアッセイで確認された。さらに、細胞増殖への影響もMTTアッセイで評価した。高密度培養条件下では、TSLC1ノックダウンによって細胞増殖が亢進した。一方、低密度培養条件下では、逆に増殖が抑制される傾向にあった。細胞密度による増殖と生存の制御は今後の研究課題とする。2.TSLC1とGIT1のin vivo上皮系組織構築への関与上皮系組織構築へのTSLC1とGIT1の相互作用の重要性をゼブラフィッシュ胚の側線感覚器官形成を指標に評価した。TSLC1とGIT1の変異体や遺伝子ノックダウンを用いて各因子の機能を制限し上皮組織構築への影響を観察したところ、TSLC1とGIT1が協調して上皮組織構築を制御することが明らかとなった。

钙粘蛋白引起的细胞间粘附力下降会增强β-连环蛋白的核功能，从而导致细胞癌变。申请人发现GIT1，一种膜转运调节剂ARF GTP酶激活蛋白(ARF-GAP)，与肿瘤抑制基因产物TSLC1形成复合物。在本研究中，我们进行了以下实验，旨在验证TSLC1通过控制钙粘蛋白的膜转运来抑制β-连环蛋白诱导的癌信号的假设。 1.TSLC1和GIT1对细胞增殖信号的抑制当使用TSLC1和GIT1的突变体、基因敲低和抑制剂限制各因子的功能时，观察到TSLC1和钙粘蛋白在细胞表面的定位和细胞间监测。 ARF-GAP 活性是稳定所必需的。此外，荧光素酶测定证实，TSLC1 的敲除增强了 β-catenin/TCF 诱导的转录活性。此外，还通过MTT测定评估对细胞增殖的影响。在高密度培养条件下，TSLC1 敲除增强了细胞增殖。另一方面，在低密度培养条件下，增殖往往受到抑制。通过细胞密度控制增殖和存活将是未来研究的主题。 2. TSLC1和GIT1参与体内上皮组织构建我们以斑马鱼胚胎侧线感觉器官形成为指标，评估了TSLC1和GIT1相互作用在上皮组织构建中的重要性。利用 TSLC1 和 GIT1 的突变体和基因敲除来限制每个因子的功能并观察它们对上皮组织构建的影响，很明显 TSLC1 和 GIT1 协同控制上皮组织构建。