EBウイルスのコードする膜蛋白質LMP2Aの腫瘍化機構の解明

EB病毒编码膜蛋白LMP2A致瘤机制的阐明

基本信息

批准号：
20590466
负责人：
福田誠
金额：
$ 2万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20590466/
关键词：
EBV LMP2A ITAM Syk 国際情報交流(アメリカ)

项目摘要

我々は、以前、EBVの膜タンパク質の一つLMP2Aによる細胞トランスフォーメーション括性の誘導には、細胞内のRas/PI3-K/Aktシグナル伝遠経路の恒常的活性化が重要であるという論文を報告した。そこで、本研究の目的は、そのシグナル伝達活性化モデルの構築と分子メカニズムを明らかにする事である。本年度は、(1)LMP2Aの74番目ど85番目のチロシンを含むITAM(配列)に着目し、LMP2AのITAMとチロシンキナーゼSykとの相互作用によるキナーゼ活性の誘導とトランスフォーメーション活性との関連を解析する事を目的として、以下の結果を得た。(1)-1.LNP2A及び工TAM変異体(ITAMのチロシンをフェニルアラニンに置換したもの)LNP2A発現レトロベクターを構琴し、LMP2Aまたは一ITAM変異体LMP-2A一発現HSC-39紬胞を樹立した。(1)-2.至適条件下において、LMP2Aは、Aktのリン酸化とソフトアガロースでのコロニー形成能を付与し、ITAM変異体LMP2Aは、Aktのリン酸化を誘導せず、ソフトアガロースでのコロニー形成能が低下した。(1)-3.抗LMP2A抗体と抗Syk抗体で免疫沈降後、LMP2A発現細胞では、LMP2AとSykのチロシンリン酸化が認められたのに対して、ITAM変異体LMP2A発現細胞では、IT'AM変異体LMP2Aのチロシンリン酸化は認められたが、Sykのチロシンリン酸化は認められなかった。(1)'=4,抗チロシンキナーゼ阻害剤とSyk阻害剤により、LMP2AによるAktのリン酸化の抑制とコロニー形成能が低下した。(1)-5.siRNAにより、SykをノックダウンしたLMP2A発現矧胞では、LMP2Aによるコロニー形成能の低下が認められた。以上の結果から、LMP2Aによるトランスフォーメーション活性の誘導には、LMP2AのITAMと宿主細胞側因子Sykとの相互作用によるチロシンリン酸化が重要な事象の一つである事が示唆された。

我们之前报道过，细胞内 Ras/PI3-K/Akt 信号通路的组成型激活对于 EBV 膜蛋白 LMP2A 诱导细胞转化非常重要。因此，本研究的目的是构建信号转导激活模型并阐明其分子机制。今年，我们将（1）重点关注包含LMP2A第74位和第85位酪氨酸的ITAM（序列），通过LMP2A ITAM与酪氨酸激酶Syk之间的相互作用来分析激酶活性的诱导和转化活性之间的关系；这样做的目的，我们获得了以下结果。 (1)-1.构建LNP2A和工程TAM突变体(ITAM酪氨酸被苯丙氨酸取代)LNP2A表达逆向载体并建立表达LMP2A或ITAM突变体LMP-2A的HSC-39细胞。 (1)-2.在最佳条件下，LMP2A赋予Akt磷酸化并在软琼脂糖上形成集落的能力，而ITAM突变体LMP2A不诱导Akt磷酸化并赋予在软琼脂糖上形成集落的能力。 (1)-3.用抗LMP2A抗体和抗Syk抗体进行免疫沉淀后，在表达LMP2A的细胞中观察到LMP2A和Syk的酪氨酸磷酸化，而观察到突变型LMP2A的IT'AM酪氨酸磷酸化，但观察到Syk的酪氨酸磷酸化。没有观察到。 (1)'=4，抗酪氨酸激酶抑制剂和Syk抑制剂抑制LMP2A对Akt的磷酸化，降低集落形成能力。 (1)-5.在使用siRNA敲低Syk的LMP2A表达细胞中，观察到LMP2A诱导的集落形成能力降低。上述结果表明，LMP2A的ITAM与宿主细胞因子Syk之间的相互作用引起的酪氨酸磷酸化是LMP2A诱导转化活性的重要事件之一。