発生とがんの進展に重要なWntシグナルに関連する蛋白Dapleの機能解析

Daple 的功能分析，一种与 Wnt 信号相关的蛋白质，对发育和癌症进展很重要

基本信息

批准号：
08J06135
负责人：
高岸麻紀 (石田麻紀)
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

DapleはWntシグナル関連分子Dishevelled (Dvl)と結合しcanonical Wnt pathwayを抑制するとして報告された(Genes cells 2003)が、その詳細な分子機構やその他のWnt signaling pathwayでの機能は分かっていない。今年度は、細胞の移動や極性をもたらすnon-canonical Wnt pathwayに注目して、以下のように実験を行った。1、遺伝子導入によるDaple蛋白強制発現や、RNA干渉法による発現抑制を行い、Wnt5a刺激して活性化されるRhoファミリーGTPasesの活性状態を調べた。その結果、細胞の極性と移動をもたらすnon・canonical Wnt pathwayにおいて、DapleはRacを特異的に活性化することを証明した。さらに、DapleがDvl/aPKC複合体形成を促すことを示し、未だ解明されていないnon-cannonical Wnt pathwayのRac活性化機構を説明しうる発見となった。2、Daple蛋白強制発現とRNA干渉法による発現抑制を行い、Dapleがもたらす細胞機能を評価した。その結果、DapleはRac活性化による膜状仮足(ラメリポディア)の形成と細胞移動を制御していることを明らかにした。3、昨年度までに作製したDaple遺伝子プロモーター下流におけるLacZ遺伝子ノックインマウスを用いて、Dapleの欠損による個体の構造異常や機能異常を解析した。Daple欠損マウスは生後成長遅延が認められた。また、皮膚の創傷治癒に関与していることを示した。

据报道，Daple 与 Wnt 信号传导相关分子 Disheveled (Dvl) 结合并抑制经典 Wnt 通路 (Genes cells 2003)，但其详细分子机制和在其他 Wnt 信号传导通路中的功能尚不清楚。今年，我们重点关注引起细胞迁移和极性的非经典Wnt通路，并进行了以下实验。 1. 我们研究了 Rho 家族 GTPases 的激活状态，该家族通过 Wnt5a 刺激、通过基因转移强制表达 Daple 蛋白以及通过 RNA 干扰抑制表达来激活。结果，我们证明 Daple 特异性激活非经典 Wnt 通路中的 Rac，驱动细胞极性和迁移。此外，我们发现 Daple 促进 Dvl/aPKC 复合物的形成，这一发现可能解释尚未探索的非规范 Wnt 通路 Rac 激活机制。 2.我们对Daple蛋白进行强制表达，并利用RNA干扰抑制其表达，并评估Daple带来的细胞功能。结果表明，Daple 通过 Rac 激活调节片状伪足的形成和细胞迁移。 3.利用去年生产的Daple基因启动子下游的LacZ基因敲入小鼠，分析了Daple缺陷引起的个体结构和功能异常。斑纹缺陷小鼠出生后表现出生长迟缓。它还被证明参与皮肤伤口愈合。