カイコの生殖機能に関する遺伝学的・分子生物学的研究

家蚕生殖功能的遗传与分子生物学研究

基本信息

批准号：
08F08805
负责人：
嶋田透
金额：
$ 0.9万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

カイコの成虫には、1組の粘液腺がある。粘液腺は、卵が散乱しないように産卵場所へ固着するために、タンパク質性の膠着物質を分泌する。しかし優性の突然変異体であるNg(Non-glue、非膠着)は、膠着物質を分泌できず、卵はバラ種となる。吉田(1998)は膠着物質のうち、ポリペプチドDZCP-2の部分アミノ酸配列を決定した。第12染色体の中央部分がこの配列をコードしていた。Ngは第12染色体21,8に占座するので、DZCP-2はNgの近傍にあると推定される。私たちは交配実験、p50T♀×p50T×d90(Ng/Ng)♂を行い、得られた個体のゲノムDNAを用いて連鎖解析を行った。その結果、DZCP-2遺伝子の両側のPCRマーカーが、Ngの表現型と完全に連鎖していた。また、DZCP-2の部分的なcDNAを用いたノーザン解析から、このRNAは7kbの1本のmRNAとして粘液腺だけで発現していた。DZCP-2のmRNA量は、p50Tとd90のいずれでも多く、RNAのサイズに関しても、2つの系統間でほとんど違いはなかった。しかし、SDS-PAGEおよび抗DZCP-2抗体を用いたウェスタンブロッティングにより、250Kdのバンドの発現が確認された。このバンドはNgヘテロ個体およびホモ個体では見られなかった。以上より、Ng変異の原因は、DZCP-2の構造遺伝子の中の何らかの異常であると推測される。これらの結果について、2009年に開催された日本蚕糸学会関東支部第60回学術講演会で講演した。

成年蚕有一对粘液腺。粘液腺分泌蛋白质胶，帮助卵粘附在产卵部位而不散落。然而，显性突变体Ng（Non-glue）无法分泌胶物质，卵呈玫瑰型。 Yoshida (1998)确定了粘附物质中多肽DZCP-2的部分氨基酸序列。 12 号染色体的中央部分编码了该序列。由于Ng位于12、21,8号染色体上，因此推测DZCP-2位于Ng附近。我们进行了交配实验 p50T♀×p50T×d90(Ng/Ng)♂，并使用所得个体的基因组 DNA 进行了连锁分析。结果，DZCP-2基因两侧的PCR标记与Ng表型完全连锁。此外，使用 DZCP-2 的部分 cDNA 进行的 Northern 分析表明，该 RNA 仅在粘液腺中表达为单个 7kb mRNA。 p50T和d90中DZCP-2 mRNA的量都很高，并且两个菌株之间的RNA大小几乎没有差异。然而，通过SDS-PAGE和使用抗DZCP-2抗体的蛋白质印迹证实了250Kd条带的表达。在 Ng 杂合子和纯合子个体中没有观察到该条带。综上所述，推测Ng突变的原因是DZCP-2结构基因的某种异常。这些成果在2009年举行的日本丝绸学会关东分会第60届学术会议上发表。