肉質向上を目指した骨格筋線維の遺伝子発現プロファイル・タイプ変換機構の解明

阐明骨骼肌纤维的基因表达谱和类型转换机制，旨在改善肉质

• 批准号: 14J40234
• 负责人: 澤野 祥子
• 金额: $ 1.16万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J40234/
• 关键词: 骨格筋; 筋線維タイプ; 遺伝子発現

食肉として利用される家畜・家禽の筋肉は、収縮特性や代謝特性の違いから遅筋タイプ（1 型）、速筋タイプ（2B 型）、その中間の2A, 2X 型に分類される。食肉の肉質や栄養機能性を決定する上で、筋線維タイプ組成は非常に重要な因子であるが、現在まで、肉質を左右する筋線維タイプの様々な特性について、定量的な評価はほとんどされていない。本研究は、各々のタイプの筋線維がどのような構成要素で成り立っているか、またタイプ間で、それらがどの程度異なり、どう相互変換するかを明らかにする事を目的としている。まず、4種類それぞれの筋線維の構成要素について、遺伝子発現を網羅的に解析し(RNA-Seqを利用）、プロファイリングを進めることを目指した。そのために、本年度（10月より半年間）は、4種類の筋線維を迅速に分類する手法を検討した。生細胞（生筋線維）に蛍光標識1次抗体（申請者らが開発）を導入する方法を試みた結果、各タイプごとに生細胞を視覚的に分類することに成功した。しかしながら、染色に一定の時間を要したため、intactな状態を反映した遺伝子発現プロファイリングが可能かどうかは疑問が残った。そこで、スチーム固定により細胞の活動を停止した後、4種類の筋線維を分類する手法の開発を推し進めた。通常行う100℃、5分間の条件下でのスチーム固定では高品質のRNAが抽出できなかったため、よりマイルドな条件（55℃、5分間）で固定を行った。その結果、マイルドな条件下でも、4種類の筋線維の視覚的分類が可能なこと、かつ、高品質のRNAが細胞から抽出できることを確認した。今後、レーザーマイクロダイセクション等を用いて、4種の筋線維を分別して取得し、それぞれのRNAを抽出後、RNA-Seqによるプロファイリングの実現を目指す。

由于收缩特征和代谢特征的差异，用作肉类的牲畜和家禽肌肉分为慢肌肉类型（类型1），快速肌肉类型（2b型）和2a，2x类型。肌肉纤维型成分是确定肉质质量和营养功能的非常重要的因素，但是迄今为止，影响肉质质量的肌肉纤维类型的大多数特征主要是定量评估。这项研究旨在阐明每种类型的肌肉纤维的组成部分由哪种组成部分组成，以及它们如何不同以及如何转化。首先，对四种类型的肌肉纤维中每种组件进行了全面分析（使用RNA-Seq）并进行分析。因此，今年（从十月起半年）检查了一种快速对四种类型的肌肉纤维进行分类的方法。由于试图在活细胞（原始肌肉纤维）中引入原代抗体（由申请人开发）的结果，他们成功地将每种类型的活细胞对活细胞进行了分类。但是，这花了一定时间的染色时间，因此是否可以看到反映完好状态的遗传表达谱分析是否可以令人怀疑。因此，在由于蒸汽固定而停止细胞活性后，我们促进了一种对四种类型的肌肉纤维进行分类的方法。在100°C和5分钟的蒸汽固定下，不能在蒸汽固定下提取高质量的RNA，因此在轻度条件下（55°C，5分钟）固定。结果，已经证实，即使在轻度条件下，可以从四种类型的肌肉纤维进行视觉分类，并且可以从细胞中提取高质量的RNA。将来，我们将使用激光微型模具部分获得四种类型的肌肉纤维，提取每个RNA，并旨在通过RNA-Seq实现分析。

项目成果

Supplementary immunocytochemistry of hepatocyte growth factor production in activated macrophages early in muscle regeneration.

• DOI: 10.1111/asj.12264
• 发表时间: 2014-12
• 期刊: Animal science journal = Nihon chikusan Gakkaiho
• 作者: S. Sawano;Takahiro Suzuki;Mai-Khoi Q. Do;H. Ohtsubo;W. Mizunoya;Y. Ikeuchi;R. Tatsumi

筋幹細胞由来の分泌性因子Sema3Aによる筋線維型自律制御機構

肌肉干细胞分泌因子Sema3A的肌纤维型自主控制机制

• 发表时间: 2014
• 作者: 鈴木貴弘;大屋雄暉;澤野祥子;大坪秀明;水野谷航;中村真子;池内義秀;辰巳隆一
• 通讯作者: 辰巳隆一

PPARδアゴニスト投与によってマウス骨格筋で発現変動する遺伝子の網羅的解析

PPARδ激动剂给药引起小鼠骨骼肌表达变化基因的综合分析

• 发表时间: 2015
• 作者: 田嶋悠璃;Johan Rung;澤野祥子;小宮佑介;中村真子;辰巳隆一,池内義秀
• 通讯作者: 辰巳隆一,池内義秀

遅筋は速筋に比べ脂肪酸取込および脂肪合成能に優れる

与快肌纤维相比，慢肌纤维具有优越的脂肪酸摄取和脂肪合成能力。

• 发表时间: 2015
• 作者: 小宮佑介;澤野祥子;田嶋悠璃;Johan Rung;辰巳隆一;中村真子;池内義秀;水野谷航
• 通讯作者: 水野谷航

Sema3A secreted from satellite cells promotes slow-twitch fiber generation.

卫星细胞分泌的 Sema3A 促进慢肌纤维的生成。

• 发表时间: 2014
• 作者: Suzuki;T.;Ohya;Y.;Ojima;K.;Mizunoya;W.;Sawano;S.;Ohtsubo;H.;Nishimatsu;S.;Anderson;J. E.;Do;M.-K. Q.;Nakamura;M.;Furuse;M.;Ikeuchi;Y.;Nohno;T.;and Tatsumi;R.
• 通讯作者: R.