脳内にｍＲＮＡを送達する高分子ミセルの創製と脳神経系難病の標的治療への展開

创造将 mRNA 输送到大脑的聚合物胶束并开发针对脑神经系统疑难杂症的靶向治疗

基本信息

批准号：
14J10621
负责人：
末吉大輝
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

当該年度では、一昨年度より開発を進めている酵素封入PIC型ベシクル（L-アスパラギナーゼ(L-ASP)封入PICsome; L-ASP@PICsome）について、その封入機構の解明およびより広範な応用可能性に向けた検討を行った。1) 封入酵素とPICsomeの構成ポリマーを予め別々の蛍光色素で標識化して調製したL-ASP@PICsomeについて、蛍光相互相関分光法を用いた評価を行ったところ、調製時の酵素濃度の増加に伴い空のPICsomeの形成割合が低下するという傾向が見られた。一方、L-ASP@PICsomeの酵素封入効率についてビシンコニン酸法を用いて定量を行った結果、調製時の酵素濃度の増加に伴い封入効率は低下の傾向を示した。以上の結果から、PICsomeはその可逆的な解離・再生挙動により、系中に存在する酵素分子を確率的に捕捉するが、内水相の限られた空間内に少数の酵素分子を担持しうるという機構が推察された。2) PICsomeの生体内でのさらなる応用可能性を探索するため、血流中以外の流動環境下での利用可能性に着目し、腹腔内投与後の腹腔内での滞留性について検討した。蛍光標識化した粒径約100 nmのPICsome、粒径約30 nmのPICミセル、およびL-ASPについて、各々をマウスに腹腔内投与した後の腹腔内滞留性をin vivo蛍光イメージングシステムを用いて評価した結果、PICsomeはPICミセルやL-ASPに比べ、著しく高い腹腔内滞留性を示した。さらにin vivo共焦点レーザー走査型顕微鏡による観察の結果、腹腔内投与した各製剤の腹腔内からの消失経路は主として血中への移行であることが示唆された。この機構の詳細は未解明であるが、腹腔内におけるPICsomeの長期滞留性は、酵素封入PICsomeの生体内リアクターとしてのより広範な応用可能性を支持するものである。

在这个财政年度，我们研究了酶封装的PIC型囊泡（L-ASP）封装的封装的机制。自上一年以来，我们一直在开发L-asp@picsome），以阐明封装机制并考虑更广泛的应用可能性。 1）当使用荧光互相关光谱法评估了通过标记封装酶和PISSOME的组成聚合物制备的L-ASP@Picsome，并发现了荧光互相关光谱，并发现在制备过程中，随着糖果浓度的增加，空中picsomes的形成速率降低。另一方面，使用二氨酸酸方法对L-ASP@PISSOME的酶封装效率进行了定量，因此，在制备过程中，封装效率往往随着酶浓度的增加而降低。从上述结果可以推断出，由于其可逆解离和再生行为，PISSOME随机捕获了系统中存在的酶分子，但是可以在内部水相的有限空间内携带少量的酶分子。 2）探索Picsome在体内的进一步应用，我们专注于在血液以外的流动环境中的可用性，并检查了腹膜内施用后其在腹膜内腔内的保留。使用体内荧光成像系统评估了粒径约100 nm的荧光标记的PICSOME的腹膜内保留，其粒径约为100 nm，粒径约为30 nm的PIC胶束，L-ASP对小鼠进行了评估，并且使用体内荧光成像系统评估了腹膜内的胶束，并且PICSOME显示出比PICELLES和PICELLES和PICELLES和L-l-asp的更高。此外，使用体内共聚焦激光扫描显微镜进行观察表明，每个腹膜内施用的从腹膜内腔的疗程的途径主要转变为血液。尽管这种机制的细节尚不清楚，但在腹腔中的长期保留率支持更广泛地应用酶封装的PICSomes作为体内反应器。