クルマエビのサイトカインネットワークの解明－血管内皮細胞増殖因子の機能解析－

虎虾细胞因子网络的阐明 - 血管内皮细胞生长因子的功能分析 -

基本信息

批准号：
14J09237
负责人：
稲田真理
金额：
$ 1万
依托单位：
Fisheries Research Agency
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J09237/
关键词：
サイトカイン血管内皮細胞増殖因子 VEGF クルマエビ生体防御

项目摘要

エビ養殖において、高密度飼育によるエビの感染防御能力の低下等により、ウイルス病や細菌感染症を主とした疾病が世界各地で発生している。本研究では、エビ類における生体防御と生命維持などの統合的な生体制御機構をサイトカインの側面から明らかにし、これらの遺伝子を早期疾病診断へ応用することを目的とした。平成26年度は遺伝子レベルおよび、タンパク質レベルの解析を行った。遺伝子レベルでは、クルマエビにおけるVEGFファミリーに属する遺伝子4種類を同定し、免疫応答を明らかにした。同定したクルマエビのVEGF1、2、3および4はそれぞれ、198、193、305および322アミノ酸残基をコードしていた。立体構造解析において、クルマエビのVEG1は2量体を形成することが予測された。ウイルス病PAVの原因ウイルスであるPRDVおよびビブリオ感染症の原因菌であるVibrio penaeicidaを用いて病原体感染時の遺伝子発現動態を定量解析した。PRDV注射後132時間の血リンパにおいて、平常時の約10倍、リンパ様器官において平常時の約40倍、VEGF1の発現が増加した。この結果より、クルマエビのVEGF1はエビ類の生体防御機構に関与している可能性が示唆された。現在、タンパク質レベルでは、リコンビナントタンパク質を作製し、その機能を解析するとともに、それを用いたポリクローナル抗体や十数アミノ酸残基からなるペプチド抗体を作製し、抗体の特異性の確認を進めている。

在对虾养殖中，由于高密度饲养导致虾抵御感染的能力下降，世界各地都在发生疾病，主要是病毒和细菌感染。本研究旨在从细胞因子的角度阐明虾的生物防御和生命支持等综合生物控制机制，并将这些基因应用于疾病的早期诊断。 2014年，我们在基因和蛋白质水平上进行了分析。在基因水平上，我们鉴定了虾中属于 VEGF 家族的四个基因，并阐明了它们的免疫反应。鉴定的虾VEGF1、2、3和4分别编码198、193、305和322个氨基酸残基。三维结构分析预测虾VEG1形成二聚体。我们使用PRDV（引起病毒性疾病PAV的病毒）和杀对虾弧菌（引起弧菌感染的细菌）定量分析了病原体感染期间的基因表达动态。 PRDV注射后132小时，血淋巴中的VEGF1表达增加到正常水平的约10倍，淋巴器官中的表达增加到正常水平的约40倍。这些结果表明虾体内的VEGF1可能参与虾的生物防御机制。目前，在蛋白质水平上，我们正在生产重组蛋白并分析其功能，并利用其生产多克隆抗体和由十多个氨基酸残基组成的肽抗体，并确认抗体的特异性。