亜種間コンソミック系統を基盤とした新規難聴モデルマウスの樹立

基于亚种间染色体株的新型听力损失小鼠模型的建立

• 批准号: 14J06119
• 负责人: 宮坂 勇輝
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J06119/
• 关键词: 遺伝学; マウス; コンソミック系統; 加齢性難聴; Lrrc30; Cdh23

本研究は、加齢性難聴感受性C57BL/6J系統と加齢性難聴抵抗性MSM/Ms系統間のコンソミック系統の解析によって同定したマウス加齢性難聴遺伝子座ahl3の実態を解明し、同定した遺伝子のマウス変異体を樹立することを目的とした。本年度はその候補として同定したLrrc30のMSM/Msマウス由来のDNA断片をC57BL/6J系統に導入したトランスジェニック（Tg）マウスとLrrc30ノックアウト（KO）マウスの表現型解析およびLRRC30と相互作用する蛋白質の探索を実施した。1. Lrrc30の加齢性難聴における感受性 (抵抗性) 効果の検証Lrrc30の加齢性難聴感受性 (抵抗性) 効果を検証するため、Tgマウスの経時的な聴力閾値を調査した結果、前年度報告した通りLrrc30の発現量が回復したTgマウスの加齢性難聴の重篤度はC57BL/6Jと比較して軽度化したが、その効果は極めて弱いものと考えられた。また、前年度樹立したLrrc30 KOマウスの経時的な聴力測定および蝸牛有毛細胞感覚毛の形態観察を実施したが、現時点で野生型との間に有意な聴力差および形態異常は認められず、本研究期間内にLrrc30の加齢性難聴への効果を実証するには至らなかった。2. LRRC30と相互作用する蛋白質の同定前年度相互作用が示唆されたCDH23とLRRC30のより詳細な発現・局在をSTED (Stimulated emission depletion) レーザー顕微鏡を用いた免疫染色により調査した結果、LRRC30は成熟後の蝸牛有毛細胞において感覚毛膜に沿って点在的に発現し、その一部はCDH23との共局在が観察された。また、CDH23と相互作用し感覚毛間をつなぐリンクに発現するPCDH15のSTEDレーザー顕微鏡による発現・局在観察を行った結果、その発現パターンはLRRC30と類似していた。これらの結果から、LRRC30は感覚毛間をつなぐリンクにも局在し、それらの蛋白質と相互作用する可能性が示唆された。

在这项研究中，我们阐明了小鼠年龄相关性听力损失基因位点 ahl3 的实际状态，该位点是通过分析易患年龄相关性听力损失的 C57BL/6J 品系和抵抗年龄相关性听力损失的 MSM/Ms 品系之间的共体品系而确定的。目的是建立与年龄相关的听力损失的小鼠突变体。今年，我们将对转基因（Tg）小鼠和Lrrc30敲除（KO）小鼠进行表型分析，其中将我们确定为候选的MSM/Ms小鼠来源的Lrrc30 DNA片段引入C57BL/6J品系中，并进行了与 LRRC30 相互作用的蛋白质的分析。 1.验证Lrrc30对年龄相关性听力损失的易感（抵抗）作用为了验证Lrrc30对年龄相关性听力损失的易感（抵抗）作用，我们调查了Tg小鼠随时间变化的听力阈值，以及如上所述，Lrrc30表达水平恢复的Tg小鼠的年龄相关性听力损失的严重程度比C57BL/6J有所降低，但这种效果被认为极其微弱。此外，我们对前一年建立的Lrrc30 KO小鼠进行了随时间的听力测定，观察​​了耳蜗毛细胞感觉毛的形态，但到目前为止，我们没有观察到它们与野生型之间存在显着的听力差异或形态异常。在本研究期间无法证明 Lrrc30 对年龄相关性听力损失的影响。 2.与LRRC30相互作用的蛋白质的鉴定我们通过使用STED（受激发射损耗）激光显微镜的免疫染色，研究了前一年被认为相互作用的CDH23和LRRC30的详细表达和定位，结果，LRRC30。成熟后沿耳蜗毛细胞的感觉毛膜零星表达，并且观察到其中一些与 CDH23 共定位。此外，使用STED激光显微镜观察与CDH23相互作用并在感觉毛之间的连接中表达的PCDH15的表达和定位，结果发现表达模式与LRRC30的表达模式相似。这些结果表明 LRRC30 也位于感觉毛之间的连接中，并且可能与这些蛋白质相互作用。

项目成果

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マウス成熟内耳におけるLrrc30の高発現と加齢性難聴抑制効果の関連を探る!

探讨小鼠成熟内耳中Lrrc30高表达与其抑制年龄相关性听力损失作用的关系！

• 发表时间: 2015
• 作者: 宮坂勇輝;安田俊平;関 優太;松岡邦枝;日比野 浩;木南 凌;吉川欣亮
• 通讯作者: 吉川欣亮

Monographs in Human Genetics -Genetics of Deafness-

人类遗传学专着 - 耳聋遗传学 -

• 发表时间: 2016
• 作者: Kikkawa Y;Miyasaka Y
• 通讯作者: Miyasaka Y

Heterozygous mutation of Ush1g/Sans in mice causes early-onset progressive hearing loss, which is recovered by reconstituting the strain-specific mutation in Cdh23

• DOI: 10.1093/hmg/ddw078
• 发表时间: 2016-05-15
• 期刊: HUMAN MOLECULAR GENETICS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Miyasaka, Yuki;Shitara, Hiroshi;Kikkawa, Yoshiaki
• 通讯作者: Kikkawa, Yoshiaki

ロイシンリッチリピート蛋白質LRRC30の発現はマウスの加齢性難聴発症を抑制する!?

富含亮氨酸的重复蛋白 LRRC30 的表达是否会抑制小鼠年龄相关性听力损失的发生？

• 发表时间: 2014
• 作者: 宮坂勇輝;安田俊平;関 優太;松岡邦枝;日比野 浩;木南 凌;吉川欣亮;宮坂勇輝，安田俊平，関 優太，松岡邦枝，日比野浩，木南 凌，吉川欣亮;宮坂勇輝，安田俊平，関 優太，松岡邦枝，設楽浩志，日比野浩，木南 凌，吉川欣亮
• 通讯作者: 宮坂勇輝，安田俊平，関 優太，松岡邦枝，設楽浩志，日比野浩，木南 凌，吉川欣亮