間質系損傷治癒細胞の起源の解明

阐明间质损伤愈合细胞的起源

• 批准号: 24791393
• 负责人: 鈴木 禎史
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2013-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24791393/
• 关键词: 幹細胞移植; 再生医療

本研究では、損傷治癒に寄与する末梢血を循環する骨髄由来の間質系細胞（Fibrocyte）の起源を明らかにすることが目的である。放射線照射後のマウスに、申請者が開発した『フローサイトメーターを用いた、高純度primary MSCs（間葉系幹細胞）分離法』で得たCAG-EGFPマウス由来のMSCsを移植すると、数ヶ月後の末梢血にCD45・GFP共陽性細胞が見られた。この細胞がCD45以外のFibrocyteマーカーを発現しているかどうか解析を行ったところ、一部の細胞でCD11b、CD14、CXCR4、CollagenIそれぞれの陽性細胞を検出することできた。また、ごく一部の細胞で共陽性な細胞を検出することができた。次に、これらの細胞が炎症性サイトカインの濃度上昇により増加するか確認するために、TGF-beta投与１、３、５、７日後のそれぞれの血中GFP細胞の数やマーカーの解析を行った。GFP陽性細胞の割合はほとんど変化なかったが、CD14陽性細胞の割合は僅かではあるが増加していた。また、CD14陽性細胞からFibrocyteを分化誘導することができるという報告があることから、このGFP・CD14共陽性細胞を分取し分化誘導を行ったが、培養がうまくいかず誘導解析を行えなかった。培養条件を改善する必要がある。今後は、ColIレポーターマウス由来のMSCs移植を行い、そこから生じる細胞が損傷部位へ浸出するか解析する予定である。Fibrocyteの起源細胞を明らかにすることで、創傷治癒に対する細胞移植療法の基礎データを得られることで、損傷治癒の発展・線維症に対する予防法の確立につなげることを目指して行きたい。

本研究的目的是阐明在外周血中循环并有助于伤口愈合的骨髓间质细胞（纤维细胞）的起源。通过申请人的“使用流式细胞仪的高纯度原代MSC（间充质干细胞）分离方法”获得的来自CAG-EGFP小鼠的MSC在照射后移植到小鼠体内，几个月后CD45/GFP共阳性细胞被移植到小鼠体内。存在于患者的外周血中。当我们分析这些细胞是否表达除 CD45 之外的纤维细胞标记物时，我们能够在一些细胞中检测到 CD11b、CD14、CXCR4 和 I 型胶原蛋白阳性细胞。此外，我们能够在少数细胞中检测到共阳性细胞。接下来，为了确认这些细胞是否由于炎症细胞因子浓度的增加而增加，我们分析了施用TGF-β后1、3、5和7天血液中的GFP细胞和标记物的数量。 GFP 阳性细胞的百分比几乎保持不变，但 CD14 阳性细胞的百分比略有增加。另外，有报道称纤维细胞可以由CD14阳性细胞诱导分化，因此我们对这些GFP/CD14共阳性细胞进行分选并诱导分化，但培养并不顺利，无法进行诱导分析.文化条件有待改善。未来，我们计划移植来自ColI报告小鼠的间充质干细胞，并分析所得细胞是否渗漏到受伤部位。通过阐明纤维细胞的起源，我们希望获得细胞移植治疗伤口愈合的基础数据，从而促进伤口愈合的发展和纤维化预防方法的建立。

项目成果

慶應義塾大学 医学部 生理学教室のホームページ

庆应义塾大学医学部生理学系主页