網膜神経節細胞特異的タンパク質Ｈｅｒｍｅｓによるアポトーシス制御機構の解析

视网膜神经节细胞特异性蛋白Hermes调控细胞凋亡机制分析

基本信息

批准号：
14J04370
负责人：
古川真理
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J04370/
关键词：
神経RNA顆粒網膜神経節細胞神経RNP顆粒神経分化

项目摘要

網膜は複数種の神経細胞から構成される組織である。RNA結合タンパク質HERMESは網膜組織の最内側面に位置する網膜神経節細胞（以下、RGC）に強く発現し、RGC軸索の終末における分岐形成に必須の働きをすることが示唆されている。これまでに私は、マウス網膜由来の神経系細胞株RGC-5を用いた解析から、薬剤刺激によって神経様に分化させたRGC-5細胞において、HERMESがストレス顆粒の代表的な構成因子として知られるG3BP1や核局在性RNA結合タンパク質NonO、PSFなどとともに、軸索や樹状突起へのRNA輸送および局所的な翻訳制御に働く神経RNA顆粒を形成することを明らかにした。興味深いことに、NonO、PSFは分化誘導前のRGC-5細胞では核にのみ存在したことから、RGC-5細胞の神経様分化をきっかけとしてNonO、PSFの核外移行、および、HERMES、G3BP1などとの細胞質性顆粒形成が誘導されることが示唆された。そこで私は、神経様分化時に働くNonO、PSFの核外移行制御機構の解明を目標に、RGC-5細胞をモデル系として翻訳後修飾に着眼した解析を行っている。阻害剤やsiRNAによる検討から、NonO、PSFの核外移行、および、細胞質における顆粒形成がSUMO化修飾によって制御されることを見出した。また、RGC-5細胞においてNonO自身がSUMO化されていることを確認しており、SUMO化の標的になり得る配列に変異を導入した変異型NonOは、分化誘導前のRGC-5細胞においても細胞質で顆粒を形成することを明らかにした。さらにRGC-5細胞の神経様分化に伴って、特定の脱SUMO化酵素のタンパク質量が増加することを見出した。現在は、SUMO化によるタンパク質の細胞内局在制御機構の詳細について、更なる検証を行っている。

视网膜是由多种神经元组成的组织。 RNA结合蛋白爱马仕在位于视网膜组织最内向的视网膜神经节细胞（RGC）中强烈表达，并被认为在RGC轴突末端的分支形成中起着至关重要的作用。 So far, I have revealed that in RGC-5, a neuronal cell line derived from the mouse retina, HERMES forms neural RNA granules, along with G3BP1, known as representative constituents of stress granules, nuclear localized RNA binding proteins NonO, PSF, and others, which are known as representative constituents of stress granules, and the formation of neural RNA granules that act as RNA转运到轴突和树突和RGC-5细胞中的局部翻译控制，这些细胞已通过药物刺激以神经样的方式分化。有趣的是，NONO和PSF仅存在于RGC-5细胞的细胞核中，然后在分化诱导之前，表明RGC-5细胞中的神经类分化会诱导NONO和PSF的核外转移，以及细胞质颗粒的核颗粒形成，与Hermes，G3BP1相比，我一直在使用G3BP1等。为了阐明在神经分化过程中起作用的Nono和PSF的核转移控制机制。已经发现，通过抑制剂和siRNA的检查，通过sumoylation修饰调节了Nono，PSF和颗粒形成的Nono，PSF和颗粒形成的核外聚体。此外，我们证实了Nono本身在RGC-5细胞中是Sumoyl的，并揭示了突变的Nono，该突变体将突变引入了一个可能是Sumoylation的序列，在分化诱导前RGC-5细胞中也形成了RGC-5细胞中细胞质的颗粒。此外，我们发现特异性去氨酰酶的蛋白质量随RGC-5细胞的神经类分化而增加。当前，正在进行进一步的验证，以进一步研究通过Sumoylation控制蛋白质内定位的机制。