サケ科魚類の卵黄形成機構に関与するリポ蛋白質受容体および関連蛋白の性状解析

鲑鱼卵黄发生机制中脂蛋白受体和相关蛋白的表征

• 批准号: 14J02064
• 负责人: 莚平 裕次
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J02064/
• 关键词: 卵黄形成; ビテロジェニン; リポ蛋白質受容体; エンドサイトーシス; 卵黄球

近年の水産業は、過度の漁獲による天然の資源量の減少や枯渇が問題になっている。そのため、種苗放流による資源量の回復や天然資源に頼らない完全養殖技術の確立が求められている。しかし、飼育下で人為的に成熟を促すこと（人為催熟）が難しい、あるいは人為催熟に成功したとしても孵化率・初期生残率（卵質）が悪いことなどが、種苗生産現場での問題点であり、改善が望まれている。卵質を左右する要因の一つとして、胚発生や稚仔魚の栄養源となる卵黄が挙げられる。卵黄蛋白質は主にビテロジェニン（Vtg）と呼ばれる前駆物質に由来する。Vtgは肝臓で合成され、受容体を介したエンドサイトーシスによって卵母細胞内に取り込まれる。Vtgは複数のサブタイプが存在することが知られており、それらサブタイプの取り込みは複数のリポ蛋白質受容体によって調節されていると考えられる。本研究ではサケ科魚類のカットスロートトラウトを用いて卵黄形成に関与するリポ蛋白質受容体や受容体と共同で働く関連因子を同定することを目的としている。平成27年度は以下の成果を得た。今年度は昨年度に同定した新規リポ蛋白質受容体のLrp13について、哺乳類細胞を用いた機能解析を行った。その結果、Lrp13単独での発現では機能性は確認できなかった。このことから、哺乳類細胞で発現したLrp13には取り込みに関与する受容体の関連蛋白が発現していないことが考えられた。また、卵黄形成への関与が示唆されたリポ蛋白質受容体関連蛋白であるArhIIについて大腸菌発現系を用いた組換え蛋白質の作製を行った。特異抗体の作製によってLrp13とArhIIの検出が可能になったことから、Lrp13とArhIIを哺乳類細胞で共発現させた際の機能解析の評価が可能となった。

近年来，由于捕获过多和自然资源损失，渔业已成为渔业行业的一个问题。因此，有必要通过释放种子恢复资源数量，并建立不依赖自然资源的完整水产养殖技术。但是，很难人为地促进圈养（人造成熟），或者即使人工成熟成功，孵化率和初始生存率（鸡蛋质量）也很差，并且在种子生产地点需要改​​善。影响卵质量的因素之一是蛋黄，这是胚胎发育和幼虫的营养来源。蛋黄蛋白主要衍生自称为卵黄蛋白（VTG）的前体。 VTG是在肝脏中合成的，并通过受体介导的内吞作用将其吸收到卵母细胞中。众所周知，VTG有多种亚型，并且认为这些亚型的摄取受多种脂蛋白受体调节。这项研究旨在鉴定参与蛋黄形成涉及的脂蛋白受体以及与鲑鱼类鱼的cutthroat鳟鱼一起使用的相关因素。 2015年，实现了以下结果：今年，使用哺乳动物细胞对LRP13进行了功能分析，这是去年确定的一种新型脂蛋白受体。结果，单独使用LRP13的表达不能证实功能。这表明在哺乳动物细胞中表达的LRP13不会表达任何参与摄取的受体的相关蛋白质。此外，使用脂蛋白​​受体相关蛋白ARHII的大肠杆菌表达系统制备重组蛋白，该蛋白已建议参与蛋黄的形成。特定抗体的产生使检测LRP13和ARHII成为可能，因此当LRP13和ARHII在哺乳动物细胞中共表达时，可以评估功能分析。

项目成果

エゾメバルの卵巣発達に伴う3型ビテロジェニン遺伝子発現量の変化

石斑鱼卵巢发育相关的3型卵黄蛋白原基因表达水平的变化

• 发表时间: 2015
• 作者: Mushirobira;Y.;Nishimiya;O.;Nagata;J.;Todo;T.;Hara;A.;and Hiramatsu;N.;竹内真登;和田怜，西宮攻，横野孝典，莚平裕次，東藤孝，川崎琢真，松原孝博，澤口小有美，原彰彦，平松尚志
• 通讯作者: 和田怜，西宮攻，横野孝典，莚平裕次，東藤孝，川崎琢真，松原孝博，澤口小有美，原彰彦，平松尚志

Detection and identification of plasma apolipoproteins using liquid chromatography-tandem mass spectrometry in cutthroat trout, Oncorhynchus clarki.

使用液相色谱-串联质谱法检测和鉴定切喉鳟鱼血浆载脂蛋白。

• 发表时间: 2014
• 作者: Mushirobira;Y.;Todo;T.;Hara;A and Hiramatsu N.
• 通讯作者: A and Hiramatsu N.

Ligand binding properties of ovarian lipoprotein receptors in the cutthroat trout

鳟鱼卵巢脂蛋白受体的配体结合特性

• 发表时间: 2014
• 作者: Mushirobira;Y.;Mizuta;H.;Luo;W.;Todo;T.;Hara;A.;Reading B.J.;Sullivan;C.V. and Hiramatsu N.
• 通讯作者: C.V. and Hiramatsu N.

カットスロートトラウト（Oncorhynchus clarki）における2型ビテロジェニンプロモーターの性状解析

鲤鱼 (Oncorhynchus clarki) 2 型卵黄蛋白原启动子的表征

• 发表时间: 2016
• 作者: Hiramatsu N;Todo T;Sullivan CV;Schilling J;Reading BJ;Matsubara T;Ryu YW;Mizuta H;Luo W;Nishimiya O;Wu M;Mushirobira Y;Yilmaz O;Hara A;莚平裕次，西宮攻，永田淳，東藤孝，原彰彦，平松尚志
• 通讯作者: 莚平裕次，西宮攻，永田淳，東藤孝，原彰彦，平松尚志

Ovarian yolk formation in fishes: Molecular mechanisms underlying formation of lipid droplets and vitellogenin-derived yolk proteins

• DOI: 10.1016/j.ygcen.2015.01.025
• 发表时间: 2015-09-15
• 期刊: GENERAL AND COMPARATIVE ENDOCRINOLOGY
• 影响因子: 2.7
• 作者: Hiramatsu, Naoshi;Todo, Takashi;Hara, Akihiko
• 通讯作者: Hara, Akihiko