リソソームのターンオーバーと数に関する制御機構

溶酶体周转和数量的控制机制

基本信息

批准号：
14J01145
负责人：
大友孝信
金额：
$ 3.16万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、昨年度に引き続きオートファジー関連遺伝子EPG5の機能を、オートファジー経路のどこに働いているのかおよびリソソーム機能に与える影響をセルラインとゲノム編集を用いた方法で評価した。これまでEPG5に変異のあるVici症候群患者皮膚線維芽細胞を用いた解析およびHeLa細胞でsiRNAを用いたEPG5のノックダウン実験を行い、オートファジー機能の低下が観察されていた。しかしエンドサイトーシスの機能は全く正常であった。細胞の懸濁液で評価したリソソーム酵素活性は正常か軽度低下に留まり、リソソームの分解機能に障害を与えるほど（～10%以下）の低下は認めず、数の変化も明らかではなかった。本年度はsiRNAで用いたものと同じHeLa細胞に対してCRISPR/Cas9を用いてEPG5遺伝子を破壊し、オートファジー及びエンドサイトーシスの評価を行った。皮膚線維芽細胞やノックダウンで認められたオートファジーの障害と正常なエンドサイトーシスはノックアウト細胞でも同様の結果を示した。さらに皮膚線維芽細胞やノックダウンにてはっきりしなかったEPG5のオートファジーへの作用点に関しては、オートファゴソームのマーカーであるLC3とリソソームのマーカーであるLamp1の共局在、オートファゴソームとリソソームの融合を酸性度で評価するtfLC3などを用いて、最終的にEPG5はオートファゴソームとリソソームの融合に働いている事を明らかにした。同様の結果は海外のグループからも確認されたが、我々の研究ではエンドサイトーシスが正常である点において未だ意見の相違がある。本研究結果は申請者を（共）筆頭著者として現在論文を投稿中である。

在今年，与去年一样，我们评估了自噬相关基因EPG5的功能，该基因在自噬途径中运行及其对使用细胞系和基因组编辑的对溶酶体功能的影响。到目前为止，使用VICI综合征患者的皮肤成纤维细胞进行了分析，该患者在EPG5中具有突变，并使用HELA细胞中的siRNA对EPG5进行了敲低实验，并且观察到自噬功能的降低。但是，内吞作用功能完全正常。在细胞悬浮液中评估的溶酶体酶活性正常或轻度降低，并且损害溶酶体降解功能的量（〜10％或更少）没有降低，而且数量没有变化。今年，使用CRISPR/CAS9在与siRNA一起使用的同一HELA细胞上破坏了EPG5基因，并评估了自噬和内吞作用。在皮肤成纤维细胞中观察到的自噬损伤和正常内吞作用，在基因敲除细胞中显示出相似的结果。此外，关于EPG5对自噬的作用点，在成纤维细胞和敲低中尚不清楚，我们使用了LC3的共定位，一种自噬体标记物和Lamp1（溶酶体标记物和TFLC3），评估了自动型和lysopys fy yypy fife fy fy yseg fy ysegy frofify frofiper 5自噬体和溶酶体。海外群体证实了类似的结果，但是我们的研究在该内吞作用方面仍然存在分歧是正常的。目前，这项研究的结果已提交给申请人作为主要作者。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

別冊新領域別症候群シリーズ「神経症候群（第2版）３」ムコリピドーシスII型，III型（チャプターの担当）

分册新区证候系列《神经系统证候（第2版）3》粘脂沉积症II型、III型（负责章节）

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
S. Hosoi;K. Matsuura;K. Ishida;H. Wang;Y. Mizukami;T. Watashige;S. Kasahara;Y. Matsuda;and T. Shibauchi;大友孝信;大友孝信
通讯作者：
大友孝信

ムコリピドーシスII型（I-cell disease）では液性免疫能が特異的に障害されている

II 型粘脂沉积症（I 细胞疾病）中的体液免疫尤其受损。