有鉤条虫の比較ゲノム解析に基づく組織指向性の解明および遊離型ＤＮＡ検査法の開発

基于猪带绦虫比较基因组分析阐明组织向性并开发游离 DNA 检测方法

基本信息

批准号：
14F04103
负责人：
迫康仁
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14F04103/
关键词：
有鉤条虫ゲノム解析 DNA検出血清 DNA検出法マルチプレックスLAMP

项目摘要

有鉤嚢虫症はテニア科条虫に属する有鉤条虫の幼虫の寄生に起因し、時に脳に寄生することにより致死的病態を引き起こす。有鉤嚢虫症は、ラテンアメリカでは脳内寄生のみによるものが大多数であるのに対し、アジアでは、脳内と他組織（主に皮下、筋肉）への寄生によるものが通常である。このような病態の差異を生じさせる組織指向性に関して、なぜアメリカ分離株とアジア分離株間で異なっているのか明確な解答は得られていない。そこで、ゲノムの塩基配列を株間で比較することにより、組織指向性を規定する因子の探索を試みた。同時に、血清中の寄生虫由来DNA検出法の確立を試みた。有鉤条虫のゲノム塩基配列を決定するために、タイ分離株では約12G、インドネシア分離株では約10Gの塩基配列データを取得することが出来た。アセンブルソフトAbyssならびにVelvetを用いてアセンブルを実施した結果、タイ分離株においては、Abyssでは最長鎖長820,191bp、velvetでは最長鎖長479,322bpの塩基配列が、インドネシア分離株においてはAbyssでは最長鎖長820,084bp、velvetでは最長鎖長479,322bpの塩基配列がアセンブルされた。今回得られた鎖長は短いため、全塩基配列を得るためにはさらなる塩基配列の取得が必要と考えられた。有鉤嚢虫感染ブタの血清虫に寄生虫由来のDNAが存在するか否かを確認する必要があるが、有鉤嚢虫感染ブタ血清を日本で調整することはきわめて困難である。そこで、有鉤嚢虫と同様に血管外寄生する条虫である多包虫を用いて、血管外寄生虫由来DNAの血清からの検出を試みた。多包虫が腹腔内に寄生しているマウスから血液を経時的に採取し、血清中の多包虫由来DNAの有無をPCR法にて確認した。その結果、PCRを2回実施することにより、マウス血清からPCR産物を得ることが出来た。

Cysticidae是由属于taperidaceae家族的taperidaceae幼虫的寄生虫引起的，有时会寄生大脑，导致致命的病理。在拉丁美洲，大多数囊性发育不良是由大脑寄生虫引起的，而在亚洲，通常是由大脑和其他组织（主要是皮下和肌肉）引起的。关于为什么在美国和亚洲分离株之间导致病理学差异的组织方向性的原因尚无明确的答案。因此，我们试图通过比较菌株之间的基因组碱序列来寻找定义组织方向的因素。同时，我们尝试建立一种检测血清中寄生虫衍生的DNA的方法。为了确定tape虫的基因组核苷酸序列，我们能够获得泰国分离株约12G的核苷酸序列数据，而印尼分离株的核苷酸序列数据约为10g。使用组装软件近似和天鹅绒进行组装，泰国分离株的组装基本序列的深渊的最长链长度为820,191 bp，而天鹅绒的最长链长度为479,322 bp，而印度尼西亚分离株的最长链长则与820,084 Bpts组装在一起，并与最早的链长度组装在一起。天鹅绒的479,322 bp。由于这次获得的链长很短，因此人们认为基本序列的进一步采集是要获得整个碱基序列的必要条件。有必要确认在感染了塞托马的猪的血清蠕虫中是否存在寄生虫衍生的DNA，但在日本调节猪血清非常困难。 Therefore, we attempted to detect DNA from the serum using polyhydatid hydatid, a tapeworm that is extravascular parasite-like in the same way as the cystic causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal causal因果可变因果会发生因果会因果会因果会因果会市发生了营养。因果可变因果会发生因果会因果会因果会因果会市发生了营养。因果因果发生因果因果发生因果因果发生因果发生因果发生因果发生因果发生因果因果因果因果因果因果因果因果血液，随着时间的流逝，在腹腔中寄生的多hydatids的小鼠，在腹腔中寄生的多hydatiD，并确认了polyhydatid dna的存在或不存在。结果，通过执行两个PCR从小鼠血清获得PCR产物。

项目成果

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专利数量（0）

Simple Identification of Human Taenia Species by Multiplex Loop-Mediated Isothermal Amplification in Combination with Dot Enzyme-Linked Immunosorbent Assay.

DOI：
10.4269/ajtmh.15-0829
发表时间：
2016-06
期刊：
The American journal of tropical medicine and hygiene
影响因子：
0
作者：
A. Nkouawa;Y. Sako;M. Okamoto;A. Ito
通讯作者：
A. Nkouawa;Y. Sako;M. Okamoto;A. Ito

Cryptic diversity in hymenolepidid tapeworms infecting humans

感染人类的膜脂绦虫的隐秘多样性

DOI：
10.1016/j.parint.2015.10.009
发表时间：
2016
期刊：
Parasitol Int
影响因子：
1.9
作者：
Nkouawa A;Haukisalmi V;Li T;Nakao M;Lavikainen A;Chen X;Henttonen H;Ito A
通讯作者：
Ito A

Evaluation of a new immunochromatographic test using recombinant antigen B8/1 for the diagnosis of cystic echinococcosis

使用重组抗原 B8/1 的新型免疫层析检测诊断囊型包虫病的评价

DOI：
10.1128/jcm.02157-15
发表时间：
2015
期刊：
J Clin Microbiol
影响因子：
9.4
作者：
Santivanez SJ;Rodriguez ML;Rodriguez S;Sako Y;Nkouawa A;Kobayashi Y;Sotomayor AL;Peralta JE;Valcarcel M;Gonzalez AE;Garcia HH;Ito A
通讯作者：
Ito A

Seroprevalence and risk factors of human cysticercosis and taeniasis prevalence in a highly endemic area of epilepsy in Bangoua, west Cameroon