Physiological and pharmacological analyses of the mammalian Peripheral vestibular system including Sensory organs and vestibular ganglia

哺乳动物外周前庭系统（包括感觉器官和前庭神经节）的生理学和药理学分析

基本信息

批准号：
19591958
负责人：
ITO Ken
金额：
$ 3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19591958/
关键词：
細胞・組織シグナル伝達神経科学生理学脳・神経

项目摘要

ラット前庭神経節細胞の細胞体にその末梢受容器(耳石器・半規管膨大部)を付着した標本を作成し、細胞生理学的実験を行う手法を確立した。培養方法としては、Leibovitz's L-15を使用した短時間(< 5hr)培養が最適であることが分かった。生理学的実験 : 末梢前庭器-前庭神経細胞体を一体とする標本において、神経のパッチクランプ記録を行うことが可能となった。脱分極刺激(電流注入)による神経発火パターンを記録したところ、主にphasic typeの発火であり、今のところ単離・培養したものと大きな違いが無い結果となっている。同様の標本において前庭神経節細胞をパッチクランプして性質を調べた上でピペット内に予め入れておいたビオチンにより逆向性染色を行う実験は、パッチクランプの成功率が不十分で、また実験中に細胞が死んだりパッチが外れてしまうトラブルが多いことから未だ信頼に足る結果が得られていない。免疫組織学的・分子生物学的実験 : 末梢前庭器-前庭神経細胞体を一体とする標本において、神経細胞の性質等を検索した後に細胞質を電極内に吸引し、Single Cell RT-PCRを行う実験は成功率が低く、その原因は単離細胞と異なり内容の吸引が難しいことであると分かった。未だ信頼性の高いデータとはなっていない。前庭神経節の興奮性の調節に関与すると分かったイオンチャネルやリガンド受容体の免疫染色については、試薬を購入して実験を開始したばかりの段階である。本研究のここまでの成果を踏まえて、今後も研究を継続する予定である。

我们制作了将外周受体（耳石器和半规管壶腹）附着在大鼠前庭神经节细胞细胞体上的标本，并建立了进行细胞生理实验的方法。作为一种培养方法，使用 Leibovitz's L-15 的短期培养（<5 小时）被发现是最佳的。生理实验：在整合了外周前庭器和前庭神经细胞体的标本中进行神经膜片钳记录已成为可能。当我们记录去极化刺激（电流注入）引起的神经放电模式时，我们发现放电主要是阶段性的，到目前为止，结果与分离和培养的结果没有显着差异。将前庭神经节细胞膜片钳在类似的标本中以研究其特性，然后用预先放入移液管中的生物素进行逆行染色的实验发现，尚未获得可靠的结果，因为细胞存在许多问题；死亡和补丁脱落。免疫组织学/分子生物学实验：在结合了外周前庭器官和前庭神经细胞体的标本中，在寻找神经细胞的特性后，将细胞质吸入电极并进行单细胞RT-PCR实验。成功率低，发现这是由于与分离的细胞不同，吸出内容物很困难。该数据尚不高度可靠。关于已知参与前庭神经节兴奋性调节的离子通道和配体受体的免疫染色，我们刚刚购买了试剂，刚刚开始实验。根据迄今为止的研究结果，我们计划在未来继续我们的研究。