マウス輸精管平滑筋における電位依存性Naチャネルの分子実体の分子薬理学的解明

小鼠输精管平滑肌电压门控Na通道分子实体的分子药理学阐明

基本信息

批准号：
07F07196
负责人：
寺本憲功
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

研究の目的:様々な平滑筋組織において活動電位が記録されtetrodotoxin投与にて選択的に消失する。しかし平滑筋型Na^+チャネルのチャネル特性やその分子実体に関しては未だ全く不明のままであった。様々な分子生物学的手法(RT-PCR法、in situハイブリダイゼーション法、免疫組織化学染色法等)および電気生理学的手法を用いてマウス輸精管平滑筋におけるNaVチャネルの主要構造を成すαサブユニット蛋白質はScn8aにてコードされるNaV1.6であると報告した(<Zhu HL>___- et al.Biophyscal Journal,94:3340-3351,2008)。本研究にてNaV1.6チャネル蛋白質をコードするScn8a遺伝子欠損マウス(NaV1.6^<-1->マウス)を用いて分子遺伝学のツールを用いて検証することを研究目的とした。研究実施内容:野生型マウス(NaV1.6^<+/+>マウス)における輸精管平滑筋細胞においてはNa^+電流は記録されたが、一方、NaV1.6^<-/->マウス輸精管平滑筋ではNa^+電流は全く記録されなかった(<Zhu HL>___- et al.British Journal of Pharmcology,in press,2009)。またNaV1.6^<+/+>マウスの輸精管平滑筋細胞に対してNa^+チャネルの選択的活性化薬であるveratridineを投与すると低濃度では活性化されたが、高濃度のveratridineではNa^+電流は抑制された。しかしveratridine投与にてtail電流および持続的なNa^+電流が新たに生じた。一方でNaV1.6^<+/+>マウス輸精管平滑筋細胞に対してveratridineを投与しても何も電流が生じなかった。以上の結果から平滑筋型NaVチャネルのαサブユニット蛋白質の分子実体はNaV1.6である可能性が強く示唆された。今後の研究計画:今後、NaV1.6^<-/->マウスとNaV1.6^<+/+>マウスを用い、両マウスにおける輸精管平滑筋の機能的な特性を比較することにて平滑筋型NaVチャネルに関する生理学的な役割を明らかにする計画である。

研究目的：在各种平滑肌组织中记录动作电位，并通过河豚毒素给药选择性消除动作电位。然而，平滑肌Na^+通道的通道特性和分子实体仍然完全未知。我们利用各种分子生物学方法（RT-PCR、原位杂交、免疫组织化学染色等）和电生理学方法，研究了构成小鼠输精管平滑肌NaV通道主要结构的α亚基蛋白。是由Scn8a编码的NaV1.6(<Zhu HL>___-等人.Biophyscal Journal, 94:3340-3351, 2008)。本研究的目的是使用分子遗传工具验证这一点，使用编码 NaV1.6 通道蛋白的 Scn8a 基因缺陷的小鼠（NaV1.6^<-1-> 小鼠）。研究进行：野生型小鼠（NaV1.6^<+/+>小鼠）输精管平滑肌细胞记录有Na^+电流；肌肉中未记录Na^+电流（<Zhu HL>___- et等人，《英国药理学杂志》，出版中，2009 年）。此外，当将Na^+通道的选择性激活剂藜芦定给予NaV1.6^<+/+>小鼠的输精管平滑肌细胞时，Na^+通道在低浓度下被激活，但在高浓度下被激活。浓度，^+电流被抑制。然而，给予藜芦碱后，新产生了尾电流和持续Na^+电流。另一方面，当将藜芦定给予NaV1.6^+/+小鼠的输精管平滑肌细胞时，没有产生电流。这些结果强烈表明平滑肌型NaV通道的α亚基蛋白的分子实体是NaV1.6。未来的研究计划：我们将使用NaV1.6^<-/->小鼠和NaV1.6^<+/+>小鼠来比较两种小鼠输精管平滑肌的功能特征，我们计划阐明其生理作用。类型 NaV 频道。