慢性低酸素曝露ハムスターの肺高血圧進展におけるキマーゼの関与

食糜酶参与慢性缺氧仓鼠肺动脉高压的发生

基本信息

批准号：
18790550
负责人：
長岡鉄太郎
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790550/
关键词：
肺高血圧低酸素キマーゼアンギオテンシン

项目摘要

肺高血圧の病態生理の研究として、アンギオテンシン(AT)-II産生酵素であるキマーゼの役割について検討する事を目的に実験を行った。人と同様のキマーゼ活性を有するという理由から、当初実験にはシリアハムスターを用いた。低圧低酸素チャンバー(410mmHg)内で3週間ハムスターを飼育し、低酸素誘発肺高血圧モデルハムスターを作成した。次に、肺内のキマーゼ蛋白の発現の有無を確認するために、肺高血圧ハムスターとコントロールの肺組織を用いて、免疫染色とwestern blottingを行った。免疫染色では明らかなキマーゼ蛋白の増加は確認出来なかったが、肺組織のwestern blottingでは、コントロールと比較して肺高血圧ハムスターのキマーゼ蛋白が明らかに増加している事が確認出来た。さらに、薬理学的にキマーゼ拮抗薬が肺高血圧の病態に関わっているか否かを確認するために、摘出した肺動脈リングを用いて実験を行った。摘出した肺動脈にアンギオテンシン変換酵素阻害薬、キマーゼ拮抗薬、もしくはその両者を前投与後にAT-1を投与し、それぞれの肺動脈の収縮を測定した。コントロールの肺動脈では、キマーゼ拮抗薬はAT-1の収縮を抑制しなかったが、肺高血圧モデルの肺動脈では、vehicleに比べてキマーゼ拮抗薬は有意にAT-1の収縮を抑制した。以上より、慢性低酸素曝露肺高血圧ハムスターにおいては、キマーゼの発現が増加しており、そのキマーゼが一部AT-1による肺動脈の収縮に関与している事が示唆された。次に肺組織を用いて、キマーゼとアンギオテンシン変換酵素活性を測定したが、コントロールと肺高血圧群で優位な差は得られなかった。キマーゼ阻害薬の肺高血圧の抑制効果を確認するため、ハムスターに対する長期投与実験を予定していたが、キマーゼ阻害薬は経口以外に投与方法がなく、また頻回の投与が必要であり未だ実験を行えていない。最近になり、ラットも人と同様のキマーゼ活性を有するという報告がされたため、低酸素誘発肺高血圧ラットの肺組織中のキマーゼ蛋白を測定したが、ラットでは明らかな増加は認めなかった。また、キマーゼがさらにRho kinaseを活性化し、肺高血圧の進展に関与していると仮説を立て、肺高血圧ラットの肺組織中のRho kinase蛋白を測定したが、こちらも優位な増加は認めなかった。キマーゼに関する実験は今後も継続し、キマーゼ阻害薬の肺高血圧ハムスターに対する長期投与実験を施行する予定である。

为了研究肺动脉高压的病理生理学，我们进行了一项实验来研究糜酶（一种血管紧张素（AT）-II 产生酶）的作用。最初，叙利亚仓鼠被用于实验，因为它们具有与人类相似的食糜酶活性。将仓鼠在低压缺氧室（410 mmHg）中饲养3周，制作缺氧性肺动脉高压模型仓鼠。接下来，为了确认肺部是否存在食糜酶蛋白表达，使用肺动脉高压仓鼠和对照的肺组织进行免疫染色和蛋白质印迹。虽然免疫染色无法证实食糜酶蛋白明显增加，但肺组织的蛋白质印迹证实，与对照组相比，患有肺动脉高压的仓鼠的食糜酶蛋白明显增加。此外，为了确认食糜酶拮抗剂是否在药理学上参与肺动脉高压的病理学，使用切除的肺动脉环进行了实验。在预先施用血管紧张素转换酶抑制剂、食糜酶拮抗剂或两者之后，将AT-1施用至分离的肺动脉，并测量每条肺动脉的收缩。在对照的肺动脉中，食糜酶拮抗剂不抑制AT-1收缩，但在肺动脉高压模型的肺动脉中，与媒介物相比，食糜酶拮抗剂显着抑制AT-1收缩。上述结果表明，慢性缺氧的肺动脉高压仓鼠中食糜酶表达增加，并且食糜酶部分参与了AT-1对肺动脉的收缩。接下来，使用肺组织测量食糜酶和血管紧张素转换酶活性，但在对照组和肺动脉高压组之间没有发现显着差异。为了证实食糜酶抑制剂抑制肺动脉高压的效果，我们原计划对仓鼠进行长期给药实验，但食糜酶抑制剂除了口服外没有其他给药途径，而且需要频繁给药，所以我们我还没有进行过实验。最近有报道称大鼠具有与人类相似的食糜酶活性，因此我们测量了缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织中的食糜酶蛋白，但在大鼠中未观察到明显的升高。我们还假设食糜酶进一步激活Rho激酶并参与肺动脉高压的发生，并测量了肺动脉高压大鼠肺组织中的Rho激酶蛋白，但也没有观察到显着增加。未来与食糜酶相关的实验还将继续进行，我们计划对患有肺动脉高压的仓鼠进行食糜酶抑制剂的长期给药实验。