レトロウイルス以外のRNAウイルスもヒト細胞内で逆転写される

除逆转录病毒外，RNA病毒也在人体细胞中进行逆转录。

• 批准号: 18790319
• 负责人: 清水 晶
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790319/
• 关键词: ウイルス; レトロトランスポゾン

今年度の目標は平成18年度の課題が残る場合はそれを継続し、終了次第VSV DNAのウイルス学的病理学的意義の解明に取り組む予定であった。今年度はこれまでの実験結果の検証をし、逆転写酵素阻害剤の効果について検討した。内容は以下の通りである。ヒトレトロトランスポゾンであるLINE-1をVSV DNAが検出されない細胞(ヒトグリオーマ由来NP-2細胞)に導入したNP-2/LINE-1細胞、マウスレトロウイルスを導入したNP-2/MuLV細胞、VSV DNAが検出されるヒト細胞株293T細胞、同じくVSV DNAが293T細胞の約100倍多く検出さるネコ腎線維芽細胞由来8C細胞を用いて検討した。これらの細胞に種々の逆転写酵素阻害剤(AZT,3TC,ddT,ddI)をそれぞれ0.1μg/mlから10μg/mlまで処理し、VSVを感染させVSV DNAの合成量を比較検討した。なお逆転写酵素阻害剤の効果はMuLV,HIVに処理し予め確認してある。NP-2/LINE-1細胞では(ddI>3TC>ddT>AZT),NP-2/MuLV細胞では(AZT>ddI>ddT>3TC)、293T細胞では(ddI>3TC=ddT=AZT)、8C細胞では(ddI>3TC>ddT=AZT)であった。LINE-1を導入した細胞とマウスレトロウイルスを導入した細胞では逆転写酵素阻害剤に対する効果のパターンが異なっていた。293T細胞、8C細胞の逆転写酵素阻害剤の感受性パターンはLINE-1を導入した細胞に類似していた。これらはVSV DNA合成には主にLINE-1が関与するという本研究の結果を支持するものであった。興味深いことにVSV DNA合成にはddIが効果的であることが分かった。VSV DNA合成に病原性(自己免疫疾患など)があるならば、治療薬の候補となるであろう。本年は最終年度であり第11回日本神経ウイルス研究会(草津)と第55回日本ウイルス学会学術集会(札幌)で発表し、多くの有益な意見を得た。また、英国ユニバーシティカレッジロンドンのレトロウイルス研究者と今後の課題、発展性についての打ち合わせも行い貴重なアドバイスを得た。現在は論文投稿準備中である。VSV DNAのウイルス学的、病理学的意義については依然未解明であるが、本研究ではVSV DNAの構造の解析までとし、意義については次回の課題としたい。

今年的目标是继续完成 2006 年剩余的任务，并在项目完成后尽快阐明 VSV DNA 的病毒学和病理学意义。今年，我们验证了迄今为止的实验结果，并研究了逆转录酶抑制剂的效果。内容如下。 NP-2/LINE-1细胞，其中将人逆转录转座子LINE-1引入到未检测到VSV DNA的细胞中（人神经胶质瘤来源的NP-2细胞），其中引入了小鼠逆转录病毒的NP-2/MuLV细胞，VSV该研究使用人类细胞系 293T 细胞和猫肾成纤维细胞衍生的 8C 细胞进行，其中可检测到 DNA，其中检测到的 VSV DNA 大约是 293T 细胞的 100 倍。这些细胞分别用0.1μg/ml至10μg/ml的各种逆转录酶抑制剂（AZT、3TC、ddT、ddI）处理，并用VSV感染以比较和检查VSV DNA合成的量。逆转录酶抑制剂的作用先前已通过治疗 MuLV 和 HIV 得到证实。 NP-2/LINE-1 细胞 (ddI>3TC>ddT>AZT)、NP-2/MuLV 细胞 (AZT>ddI>ddT>3TC)、293T 细胞 (ddI>3TC=ddT=AZT)、8C 细胞中， (ddI>3TC>ddT=AZT)。转染 LINE-1 的细胞和转染小鼠逆转录病毒的细胞对逆转录酶抑制剂具有不同的作用模式。 293T和8C细胞对逆转录酶抑制剂的敏感性模式与LINE-1转染细胞相似。这些结果支持了本研究的结果，即LINE-1主要参与VSV DNA合成。有趣的是，ddI 对 VSV DNA 合成有效。如果 VSV DNA 合成具有致病性（例如自身免疫性疾病），那么它将成为治疗药物的候选者。今年是最后一年，我们在第11届日本神经病毒研究会（草津）和第55届日本病毒学会（札幌）学术会议上发表了演讲，收到了很多有用的意见。我们还与英国伦敦大学学院的逆转录病毒研究人员进行了会面，讨论了未来的问题和发展潜力，并获得了宝贵的建议。该论文目前正在准备提交。虽然VSV DNA的病毒学和病理学意义尚不清楚，但本研究仅分析VSV DNA的结构，其意义将是下一步研究的主题。