Start-up study of the structural biology of cellulose synthase complex

纤维素合酶复合物结构生物学的启动研究

• 批准号: 23688021
• 负责人: IMAI Tomoya
• 金额: $ 15.06万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23688021/
• 关键词: セルロース; セルロース合成酵素; 電子顕微鏡; 単粒子解析; 構造生物学; 機能再構成; c-di-GMP; セルロース合成酵素複合体; CesA; 大腸菌発現系

Electron microscopy was used for the three-dimensional structural determination of cellulose synthase complex. Preliminary analysis showed a three-dimensional model with some features. Our model is too primitive to be analyzed in detail, but it was shown as a result that the first X-ray crystallographic structure of cellulose synthase, which was reported in 2013 by another group, fits well to our structural model. We thus believe that our strategy is available for the structural biology of cellulose synthase, which will be used for future studies.We also conducted, for discussing the structural data, some functional analyses of cellulose synthase: kinetics of crude enzyme and functional reconstitution of recombinant cellulose synthase in E. coli. Especially the latter result allows the functional analysis to be done with recombinant protein. We designated this system as CESEC (CEllulose Synthesis in E. Coli), which will be a promising tool for studying cellulose synthase.

电子显微镜用于纤维素合酶复合物的三维结构测定。初步分析显示了具有某些特征的三维模型。我们的模型太原始了，无法详细分析，但是结果表明，纤维素合酶的第一个X射线晶体学结构（由另一组在2013年报告）非常适合我们的结构模型。因此，我们认为我们的策略可用于纤维素合酶的结构生物学（将用于未来的研究）。我们还进行了讨论结构数据的一些功能分析，对纤维素合酶的一些功能分析：粗酶的动力学和大肠杆菌中重组纤维素合酶的功能重构。尤其是后一种结果允许使用重组蛋白进行功能分析。我们将该系统指定为CESEC（大肠杆菌中的纤维素合成），这将是研究纤维素合酶的有前途的工具。

项目成果

Functional Reconstitution of Cellulose Synthase in Escherichia coli

• DOI: 10.1021/bm501217g
• 发表时间: 2014-11-01
• 期刊: BIOMACROMOLECULES
• 影响因子: 6.2
• 作者: Imai, Tomoya;Sun, Shi-jing;Sugiyama, Junji
• 通讯作者: Sugiyama, Junji

酢酸菌の膜内在性セルロース合成活性の再評価

醋酸菌整体膜纤维素合成活性的再评价

• 发表时间: 2012
• 作者: 下農健治;杉山淳司;今井友也
• 通讯作者: 今井友也

セルロース合成活性の速度論的解析 ー可溶化が合成活性に及ぼす影響－

纤维素合成活性的动力学分析 - 增溶对合成活性的影响 -

• 发表时间: 2012
• 作者: Tien Duc Pham;Motoyoshi Kobayashi;Yasuhisa Adachi;Kenji Fukuda;下農健治
• 通讯作者: 下農健治

GxCesB（酢酸菌セルロース合成酵素生魚サブユニット）の電子顕微鏡構造解析

GxCesB（醋杆菌纤维素合酶生鱼亚基）的电镜结构分析

• 发表时间: 2011
• 作者: 小西美紅;鈴木健一;今村彰宏;安藤弘宗;石田秀治;楠見明弘;木曽真;今井友也
• 通讯作者: 今井友也

セルロース合成活性の速度論的解析 ー酢酸菌を用いて－

纤维素合成活性的动力学分析-使用乙酸菌-

• 发表时间: 2011
• 作者: Mizuki Tsuta;Kaori Fujita;Mario Shibata;Masatoshi Yoshimura;Mito Kokawa;Junichi Sugiyama;下農健治
• 通讯作者: 下農健治