脊椎動物の尾形成を支える幹細胞の役割

干细胞在支持脊椎动物尾巴形成中的作用

基本信息

批准号：
12J08576
负责人：
川地輝明
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

SN前駆細胞および神経上皮細胞におけるSox2の発現・局在の解析および神経分化における必要性の検証を行った。SN前駆細胞におけるSox2の発現およびタンパク質局在の解析の結果、Sox2のmRNAのシグナルはtail budの背側のSN前駆細胞および分化した神経上皮細胞において特異的に検出された。しかし蛍光免疫染色の結果、Sox2タンパク質はSN前駆細胞全域の核で局在が検出された。また免疫染色の蛍光強度は、背側のSN前駆細胞および分化した上皮細胞で非常に強いシグナルで検出された一方で、腹側のSN前駆細胞においては微弱なシグナルしか検出されなかった。昨年までの成果よりSN前駆細胞の分化においてSox2の十分性が示唆されたことから、必要性の検証を行った。Tet-on systemを用いて、tail budを形成後のSN前駆細胞にSox3HMGドメインにショウジョウバエ由来の転写抑制因子Engrailedから転写抑制ドメインを融合させた融合タンパク質を発現させた。その結果、control SN前駆細胞は正常にtail budおよび神経管で検出されたが、Sox3HMG-EnR発現SN前駆細胞はtail budから検出されなかった。中胚葉系細胞の前駆領域であるprimitive streakに同様の操作を行ってもcontrol細胞と挙動の差は見られなかったことから、SoxB1 familyの機能阻害によるtail budからの細胞の消失はSN前駆領域特異的であると考えられる。また、先述のSox2の発現・局在の結果と合わせて考えると、低いレベルでのSox2の発現はSN前駆細胞の生存に必要であり、Sox2の発現レベルが上昇することで神経管上皮細胞へ分化すると考えられる。現在は、SN前駆細胞の生存・維持におけるSox2の働きについて解析を進めつつ、論文投稿に向けてデータをまとめている。

我们分析了Sox2在SN祖细胞和神经上皮细胞中的表达和定位，并验证了其在神经分化中的必要性。对 SN 祖细胞中 Sox2 表达和蛋白定位的分析表明，在尾芽背侧的 SN 祖细胞和分化的神经上皮细胞中特异性检测到 Sox2 mRNA 信号。然而，荧光免疫染色的结果显示，Sox2 蛋白定位于所有 SN 祖细胞的细胞核中。此外，背侧SN祖细胞和分化上皮细胞的免疫染色荧光强度非常强，而腹侧SN祖细胞仅检测到微弱的信号。截至去年的结果表明Sox2在SN祖细胞的分化中是充分的，因此我们验证了其必要性。使用 Tet-on 系统，我们表达了一种融合蛋白，其中 Sox3HMG 结构域与尾芽形成后 SN 祖细胞中的果蝇转录抑制蛋白的转录抑制结构域融合。结果，在尾芽和神经管中正常检测到对照SN祖细胞，但在尾芽中未检测到表达Sox3HMG-EnR的SN祖细胞。即使对作为中胚层细胞的祖细胞区域的原条进行类似的操作，也没有观察到与对照细胞的行为差异。因此，由于SoxB1家族功能的抑制，尾芽中的细胞消失可能是由于。 SN祖细胞区域被认为是特异性的。此外，当结合上述Sox2表达和定位的结果考虑时，低水平的Sox2表达对于SN祖细胞的存活是必需的，并且Sox2表达水平增加导致神经管上皮细胞分化。。目前，我们正在分析Sox2在SN祖细胞存活和维持中的作用，并整理数据以供发表。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Study of secondary neurulation : stem cell-like behavior of neural tube precursors implicated by transplantation of EGFP-labeled tail bud～Secondary Neurulation研究 : EGFP標識tail budの移植から浮かび上がった神経管前駆細胞の幹細胞様の挙動～

二次神经形成研究：EGFP标记尾芽移植所涉及的神经管前体细胞的干细胞样行为～二次神经形成研究：EGFP标记尾芽移植所涉及的神经管前体细胞的干细胞样行为～

DOI：
发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
0
作者：
T. Hirano;R. Kurita;K. Murase and K. Nagai;村瀬功一;Koichi Murase;Koichi Murase;Koichi Murase;Koichi Murase;村瀬功一;村瀬功一;Koichi Murase;Koichi Murase;村瀬功一;Koichi Murase;村瀬功一;Koichi Murase;Koichi Murase;Koichi Murase;村瀬功一;川地輝明
通讯作者：
川地輝明

Secondary Neurulation : The tail-specific neural formation is sup-ported by a novel type neural stem cells

二级神经：尾部特异性神经形成由新型神经干细胞支持

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
T. Hirano;R. Kurita;K. Murase and K. Nagai;村瀬功一;Koichi Murase;Koichi Murase;Koichi Murase;Koichi Murase;村瀬功一;村瀬功一;Koichi Murase;Koichi Murase;村瀬功一;Koichi Murase;村瀬功一;Koichi Murase;Koichi Murase;Koichi Murase;村瀬功一;川地輝明;川地輝明
通讯作者：
川地輝明