腸管の腫瘍形成過程における情報伝達分子の生体内ＦＲＥＴイメージング

肠道肿瘤发生过程中信号分子的体内 FRET 成像

基本信息

批准号：
12J04268
负责人：
櫻井敦朗
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度はWnt経路と腸上皮組織の恒常性維持の関係を調べた。そのためにWnt経路の活性化をモニターできる7xTOP-mCherryベクターを作成し、腸上皮幹細胞(CBC stem cell)でGFPを発現するLgr5-EGFPマウスから単離したクリプトにレンチウイルスで導入することで幹細胞とWnt経路の活性化を可視化することに成功した。CBC stem cellをマークするLgr5はWnt経路のターゲットであり、CBC stem cellはWnt経路が活性化しているためmCherryを発現すると予想していたが、実際にはEGFPとmCherryの発現は互いに排他的なパターンを示した。FACSによりLgr5-TOP-、Lgr5+TOP-、Lgr5-TOP+、Lgr5+TOP+を分取し、幹細胞マーカーや分化マーカーの発現を調べたところ、Lgr5-TOP+の細胞はLgr5でマークされるCBC stem cellとは異なる幹細胞集団である+4幹細胞のマーカーや分化した細胞のマーカーをよく発現していることが明らかとなった。次に、上記4種類の細胞群の幹細胞性を調べるために、FACSした細胞を再び培養し、コロニー形成効率を計測した。その結果、Lgr5+TOP-では効率よくコロニーを形成したが、その他の細胞群ではほとんどコロニーを形成しなかった。以上の結果から、CBC stem cellよりも他の細胞種でより強くWnt経路が活性化していることが示唆された。そして、これらの細胞はCBC stem cellとは異なり幹細胞性を持たない分化した細胞であることが示唆された。本研究は初めて生きたクリプトでWnt経路の活性を可視化したものであり、腸上皮におけるWnt経路の新たな役割を解明する一歩となると考えている。

今年，我们研究了Wnt途径与肠上皮组织的体内平衡之间的关系。为此，我们创建了一个7xtop-mcherry矢量，该矢量可以监测WNT途径的激活，并将其与慢病毒一起引入了从LGR5-EGFP小鼠的密码学隔离中，该密码分离了，该小鼠在肠上皮干细胞（CBC干细胞）中表达GFP，从而使干细胞和Wnt途径的激活激活。标记CBC干细胞的LGR5是WNT途径的靶标，我们希望CBC干细胞由于被激活的Wnt途径而表达MCHERRY，但实际上，EGFP和MCHERRY表达表现出相互排斥的模式。 Lgr5-TOP-, Lgr5+TOP-, Lgr5-TOP+, and Lgr5+TOP+ were separated by FACS, and the expression of stem cell markers and differentiation markers was examined, and it was revealed that Lgr5-TOP+ cells well express markers of +4 stem cells, a stem cell population that is different from the CBC stem cells marked with Lgr5, and markers of differentiated cells.接下来，为了研究上面四种细胞组的干细胞特性，再次培养FACS细胞并测量菌落形成效率。结果，用LGR5+TOP-有效形成菌落，但在其他细胞组中很少形成菌落。以上结果表明，与CBC干细胞相比，在其他细胞类型中，WNT途径更强烈。据认为，与CBC干细胞不同，这些细胞是没有干细胞特性的分化细胞。这项研究可视化WNT途径在第一个生命的加密密码学中的活性，我们认为这将是阐明Wnt途径在肠上皮中的新作用的一步。