HSP72相互作用解析に基づいた新規腫瘍マーカースクリーニング法の開発

基于HSP72相互作用分析开发新的肿瘤标志物筛选方法

基本信息

批准号：
12J02543
负责人：
田中昌子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、熱ショックタンパク質72(HSP72)が腫瘍特異抗原と結合したまま、細胞外へと放出されることが報告された。そこで、本研究では血中のHSP72と結合するタンパク質を質量分析計にて同定および比較解析することで、多発性骨髄腫のマーカー探索を試みた。2年目の目標は、1年目に確立した血中のHSP72複合体単離法(NHq法)により同定したマーカー候補分子が、多発性骨髄腫のマーカーとして妥当であるか検証することである。1. マーカー候補タンパク質とHSP72の結合確認1年目に同定された4つの候補分子のうち、2分子についてHSP72との結合を確認したところ、マーカーとなり得る分子が全長タンパク質だけではなく、断片化したフラグメントタンパク質である可能性が示唆された。さらに多発性骨髄腫の培養細胞を用いて解析したところ、全長タンパク質は主に細胞内でHSP72と結合しているが、フラグメントタンパク質は細胞内外でHSP72と結合していた。以上より、HSP72に結合するフラグメントタンパク質は腫瘍細胞から積極的に分泌されている可能性がある。2. ELISAによる定量解析および疾患特異性の評価全長タンパク質として検出されたHistone H4の血中濃度をELISA法にて定量し、健常者22例、多発性骨髄腫患者30例、その他血液疾患患者30例において比較解析した。その結果、3群に有意な差は見られず、Histone H4は多発性骨髄腫特異的なマーカーとしては妥当でないことが明らかとなった。また、すべての群において、血清中のHSP72レベルとHistone H4レベルに相関は見られなかった。3. 患者検体数を増やした再スクリーニング質量分析による同定精度を高めるために、患者検体数を10例に増やし、マーカー候補分子の再スクリーニングを行った。その結果、10例すべての患者から同定されたタンパク質が3つであった。その中から最も同定精度の高かったTim13について解析を進めている。

最近，据报道，热休克蛋白72（HSP72）细胞外释放，同时仍与肿瘤特异性抗原结合。因此，在这项研究中，我们试图通过识别和比较使用质谱仪在血液中与HSP72结合的蛋白质来寻找多发性骨髓瘤的标记。第二年的目的是验证第一年中建立的血液HSP72复合分离方法（NHQ方法）确定的候选标记分子是否是多发性骨髓瘤的有效标记。 1。从第一年确定的四个候选分子中确认标记候选蛋白与HSP72的结合，确认了两个分子与HSP72的结合，这表明潜在的标记物分子可能不仅片段不仅片段化，而不仅可能碎裂全长的蛋白质，而且还可以碎裂碎片蛋白。此外，使用培养的多个骨髓瘤细胞进行分析，尽管全长蛋白主要与细胞内的HSP72结合，但在细胞内外结合了HSP72的片段蛋白。从上面，与HSP72结合的片段蛋白可能从肿瘤细胞中分泌。 2。通过ELISA进行定量分析和疾病特异性评估。使用ELISA方法对组蛋白H4的血液浓度H4进行了定量，并在22名健康患者，30例多发性骨髓瘤患者和其他30例血液学疾病患者中进行了比较分析。结果显示这三组之间没有显着差异，并且组蛋白H4不是多发性骨髓瘤特有的有效标记。此外，在所有组中，血清HSP72水平和组蛋白H4水平之间均未发现相关性。 3。随着患者标本数量增加以提高质谱的识别精度，重新筛选，患者标本的数量增加到10，并重新筛选候选标记分子。结果表明，从所有10名患者中鉴定出三种蛋白质。我们目前正在对TIM13进行分析，该分析具有最高的识别精度。