Analysis transcriptional mechanism and physiological function of a BTB-oontaining zinc finger protein, CIBZ

含BTB锌指蛋白CIBZ的转录机制和生理功能分析

基本信息

批准号：
18590268
负责人：
MATSUDA Eishou
金额：
$ 2.57万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18590268/
关键词：
Transcription BTB CtBP apoptosis caspase p53 PARP MEF CASTing法細胞周期ノックアウトマウス

项目摘要

We previously identified and characterized a murine BTB-containing protein, CIBZ (ZBTB38 in human), that interacts with CtBP and binds to methylated CpGs. However, its physiological function remained unknown. As CtBP is reportedly involved in p53-independent programmed cell death, we examine here whether CIBZ is associated with apoptosis. We found that CIBZ was highly expressed in proliferating C2C12 cells, but that its expression levels decreased upon induction of apoptosis by serum starvation. Knockdown of CIBZ by siRNA in C2C12 cells induced apoptosis, as determined by an increase of annexin V/PI labeling, activation of caspase-3, and cleavage of PARP. CIBZ inhibition also activated caspase-7 and caspase-9, suggesting that CIBZ-associated apoptosis occurs through the mitochondrial pathway. Notably, knockdown of CIBZ in p53 -/- MEF cells also activated caspase-3 and cleavage of PARP, indicating that CIBZ-associated apoptosis is mediated by a p53-independent pathway; however, since both common and distinct targets are regulated by CIBZ-and CtBP-associated apoptosis, we conclude that more than one pathway is involved. Finally, using mutagenesis and an in vitro caspase cleavage assay, we show that CIBZ is a novel substrate of caspase-3, and identify two caspase-3 recognition sites. These findings indicate, collectively, that CIBZ plays an important role by participating in the negative regulation of apoptosis in murine cells.

我们之前鉴定并鉴定了一种含有 BTB 的小鼠蛋白 CIBZ（人为 ZBTB38），它与 CtBP 相互作用并与甲基化 CpG 结合。然而，其生理功能仍不清楚。据报道，CtBP 参与 p53 独立的程序性细胞死亡，因此我们在此检查 CIBZ 是否与细胞凋亡相关。我们发现 CIBZ 在增殖的 C2C12 细胞中高表达，但其表达水平在血清饥饿诱导细胞凋亡后下降。通过膜联蛋白 V/PI 标记的增加、caspase-3 的激活和 PARP 的裂解确定，C2C12 细胞中 siRNA 敲低 CIBZ 会诱导细胞凋亡。 CIBZ 抑制还激活 caspase-7 和 caspase-9，表明 CIBZ 相关细胞凋亡通过线粒体途径发生。值得注意的是，p53 -/- MEF 细胞中 CIBZ 的敲低也激活了 caspase-3 和 PARP 的裂解，表明 CIBZ 相关的细胞凋亡是由 p53 独立途径介导的。然而，由于共同和不同的靶标均受 CIBZ 和 CtBP 相关细胞凋亡的调节，因此我们得出结论，涉及不止一种途径。最后，通过诱变和体外 caspase 裂解测定，我们证明 CIBZ 是 caspase-3 的新型底物，并鉴定了两个 caspase-3 识别位点。这些发现共同表明，CIBZ 通过参与小鼠细胞凋亡的负调控发挥着重要作用。

项目成果

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Tomonori Nishii, Yasumasa Ishida, and Masashi Kawaichi *equal contributor and corresponding author

Tomonori Nishii、Yasumasa Ishida 和 Masashi Kawaichi *同等贡献者和通讯作者

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yu; Oikawa; Eishou; Matsuda
通讯作者：
Matsuda

Down-regulation of CIBZ, a novel substrate of caspase-3, induces apoptosis

Caspase-3 的新型底物 CIBZ 下调可诱导细胞凋亡

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yu Oikawa; Eishou Matsuda^*; Tomonori Nishii; Yasumasa Ishida;Masashi Kawaichi ^*equal contributor;corresponding author
通讯作者：
corresponding author

Down-regulation of CIBZ, a Novel Substrate of Caspase-3, Induces Apoptosis*

CIBZ（一种 Caspase-3 的新型底物）的下调可诱导细胞凋亡*