植物の細胞伸長の制御に関与するMAPキナーゼフォスファターゼの解析

参与植物细胞伸长控制的 MAP 激酶磷酸酶分析

基本信息

批准号：
17770035
负责人：
加藤壮英
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

PHS1タンパク質は、配列情報とフォスファターゼ活性を示すことから、MAPキナーゼフォスファターゼとして機能することが推測された。また、dominant negative変異体の解析から、表層微小管を介した根の伸長制御に関与することが示されている。本研究は、PHS1の機能解析とPHS1に関与する新たな微小管配向制御因子の発見により、植物の表層微小管の形成・調節機構と、細胞伸長制御のメカニズムを明らかにしていくことを目的としている。1. PHS1と相互作用して表層微小管の配向を制御する因子を単離するため、phs1-1変異体に変異原処理し表現型の回復と強調を指標に遺伝的に関与する因子の単離を試みた。前年度よりあわせて、100系統をこえる表現型回復変異体を単離した。12系統が、PHS1遺伝子の変異によるものであり、phs1-1が機能獲得変異であることを示唆する。さらに、4系統については、βチューブリンのミスセンス変異による優性変異体であることが示された。これは、phs1-1変異が微小管の配向制御に非常に強く影響を与えていることを示唆する。さらに、微小管関連因子SPR1の優勢変異体も単離した。機能的なSPR1-GFP融合タンパク質をもつ植物を作出し、局在に大きな変化がないことは確認した。2.表層微小管の形成・調節にMAPキナーゼカスケードの存在が示唆された。そこで、19のMAPキナーゼ遺伝子、8のMAPキナーゼキナーゼ遺伝子のT-DNA挿入による機能欠損変異体を入手した。これら変異体の挿入の有無を確認し、表層微小管への影響を確認できる段階になった。3. PHSゲノムにGFPを融合した機能的な遺伝子を作成した。BFA感受性の細胞コンパートメントに多く存在することが予想された。

根据其序列信息和磷酸酶活性，推断 PHS1 蛋白具有 MAP 激酶磷酸酶的功能。此外，对显性失活突变体的分析表明，它参与通过表面微管控制根伸长。本研究的目的是通过对PHS1进行功能分析，发现PHS1涉及的新的微管定向控制因子，阐明植物表面微管的形成和调控机制以及细胞伸长控制的机制。 1.为了分离与PHS1相互作用并控制表面微管方向的因子，我们用诱变剂处理phs1-1突变体，并以表型的恢复和增强为指标来鉴定与遗传相关的因子。离开。自去年以来，我们已经分离出100多个表型恢复突变体。 12 株是由于 PHS1 基因突变所致，表明 phs1-1 是一种功能获得性突变。此外，由于 β-微管蛋白的错义突变，四种菌株被证明是显性突变体。这表明phs1-1突变对微管方向的控制具有非常强的作用。此外，我们还分离出微管相关因子SPR1的显性突变体。我们生成了含有功能性 SPR1-GFP 融合蛋白的植物，并证实定位没有重大变化。 2.提出了表面微管的形成和调节中存在MAP激酶级联。因此，我们通过插入T-DNA获得了19个MAP激酶基因和8个MAP激酶基因的功能缺陷突变体。我们现在正处于可以确认这些突变体是否插入并确认它们对表面微管的影响的阶段。 3. 通过将 GFP 与 PHS 基因组融合来创建功能基因。据预测，它在 BFA 敏感的细胞室中含量丰富。