Creation of A Multi-Color Sensing System for Protease Activities.

创建用于蛋白酶活性的多色传感系统。

• 批准号: 23651230
• 负责人: SAKAMOTO Seiji
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23651230/
• 关键词: プロテアーゼ; 蛍光タンパク質; 発光タンパク質; バイオプローブ; バイオセンサー; 分割型タンパク質; 分割型蛍光タンパク質; 分割型インテイン; カスパーゼ; アポトーシス

We designed a dual-protease biosensor for two different protease activities using doubly inhibited split-GFP, which was fully activated only when two proteases were present at the same time. In the system, N- and C-terminal fragments of split-GFP of split-luciferase were cyclized via the distinct protease substrate sequences, respectively. The simultaneous addition of two proteases resulted in cleavage of both substrate linkers, leading to the functional recovery of split-GFP and split-luciferase. These results clearly demonstrate the successful construction of the dual-protease biosensor for two different caspase activities by using split-GFP and split-luciferase.

我们使用双重蛋白酶活性设计了双聚酶生物传感器，并使用双重抑制的分裂GFP设计，仅在同时存在两个蛋白酶时才完全激活。在系统中，分别通过独特的蛋白酶底物序列对分裂葡萄酸酶的分裂GFP的N-和C末端片段进行了环状。同时添加两个蛋白酶会导致两个底物接头的切割，从而导致分裂GFP和裂解酸酶的功能恢复。这些结果清楚地表明，通过使用分裂GFP和分裂脂肪酶，成功构建了两种不同的caspase活性的双重蛋白酶生物传感器。

项目成果

分割型タンパク質を基体とするセンシングシステムの構築

基于裂解蛋白的传感系统的构建

• 发表时间: 2012
• 作者: Seiji Sakamoto;Yasuyuki Araki;and Takehiko Wada;谷川美頼;坂本清志,寺内美香,Hugo Anna,瀧集作,荒木保幸,和田健彦
• 通讯作者: 坂本清志,寺内美香,Hugo Anna,瀧集作,荒木保幸,和田健彦

Creation of A Sensing System for Caspase Activities by Combination of Split-Fluorescent Proteins and Split-Inten

结合分裂荧光蛋白和分裂强度创建 Caspase 活性传感系统

• 发表时间: 2012
• 作者: Seiji Sakamoto;Anna Hugo;Mika Terauchi;Yasuyuki Araki;and Takehiko Wada
• 通讯作者: and Takehiko Wada

Creation of Simultaneous Dual-Color Sensing System for Caspase Activities using Split-Fluorescent Proteins

使用分裂荧光蛋白创建半胱天冬酶活性同步双色传感系统

• 发表时间: 2012
• 作者: Seiji Sakamoto;Yasuyuki Araki;and Takehiko Wada;谷川美頼;坂本清志,寺内美香,Hugo Anna,瀧集作,荒木保幸,和田健彦;前田達哉;高原照直;Seiji Sakamoto;葛西秀俊;Seiji Sakamoto;谷川美頼;Seiji Sakamoto
• 通讯作者: Seiji Sakamoto

分割型タンパク質を用いたカスパーゼ活性の特異的検出

使用裂解蛋白特异性检测 caspase 活性

• 发表时间: 2012
• 作者: Takahara T;Maeda T;坂本清志,Anna Hugo,寺内美香,荒木保幸,和田健彦;坂本清志,和田健彦;Maeda T;坂本清志,Anna Hugo,寺内美香,荒木保幸,和田健彦
• 通讯作者: 坂本清志,Anna Hugo,寺内美香,荒木保幸,和田健彦

分割型タンパク質を基体とするプロテアーゼ活性検出システムの構築

基于裂解蛋白的蛋白酶活性检测系统的构建

• 发表时间: 2012
• 作者: 坂本清志;寺内美香;瀧集作;荒木保幸;和田 健彦
• 通讯作者: 和田 健彦