雄性生殖細胞の簡便凍結保存法と顕微授精技術を利用した産子獲得技術の開発

利用雄性生殖细胞的简易冷冻保存方法和显微授精技术开发后代获得技术

基本信息

批准号：
17700381
负责人：
越後貫成美
金额：
$ 1.86万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17700381/
关键词：
実験動物発生工学凍結保存雄性生殖細胞顕微授精マウス

项目摘要

誰にでもどのような場面でも即対応できる簡便な雄性配偶子の凍結保存技術の開発を目的として、雄マウスの精巣上体、精巣を組織のまま凍結チューブに入れて凍害剤や液体窒素等の特殊な道具を用いずに-80℃ディープフリーザーで凍結保存を行った。融解は凍結チューブを室温で水に浸けることにより行った。融解後、組織を細切して細胞の採取を行った。精巣上体精子、精巣精子、円形精子細胞をそれぞれマウス未受精卵に顕微注入して受精能について検討したところ、全ての細胞種より産仔が得られた。液体窒素なしで保存可能であることを応用して凍結サンプルのドライアイスによる輸送を試みた。イギリスから輸送後、日本において精巣上体精子、精巣精子、伸長精子細胞を用いた顕微授精-胚移植を行ったところ全ての細胞種より産仔が得られた。この結果よりドライアイスによる輸送後も受精能を保持していることが明らかになった。また、1年間、-80℃にて凍結保存した精巣および精巣上体由来の精子、伸長精子細胞、円形精子細胞からも産仔が得られ本法は長期保存も可能であることが明らかになった。さらに15年間、-20℃で凍結保存されていたマウス個体を融解して回収した精巣精子を用いて顕微授精を行ったところ、2系統から合計27匹の産仔が得られた。これらの産仔は形態学的に正常で成熟後に繁殖能も正常であることが確認された。これらの結果により、本凍結方法は簡便かつ安全に雄性配偶子を凍結保存ができ、ドライアイスによる輸送が可能な方法であることが明らかになった。つまり凍結技術や液体窒素等がない場合でも凍結保存が可能で、顕微授精技術のある研究室に輸送することで産仔獲得の可能性が考えられる有用な技術といえる。さらには凍結個体由来の精子でも産仔が得られたことより、永久凍土に眠る絶滅動物の精子を回収して近縁種の卵子に顕微授精することで産仔が得られる可能性も考えられる。

为了开发一种任何人在任何情况下都可以使用的简单的雄性配子冷冻保存技术，将雄性小鼠的附睾和睾丸放入冷冻管中，并用冷冻毒性剂、液氮等进行处理。 -80°C 深度冷冻柜，无需使用任何特殊工具。通过将冷冻管浸入室温水中进行解冻。解冻后，将组织切成小片并收集细胞。当附睾精子、睾丸精子和圆形精子细胞分别显微注射到未受精的小鼠卵子中并检查它们的受精潜力时，从所有细胞类型中获得了后代。我们尝试使用干冰运输冷冻样品，利用它们可以在没有液氮的情况下储存的事实。从英国运来后，我们在日本使用附睾精子、睾丸精子和细长精子细胞进行显微授精和胚胎移植，并从所有细胞类型中获得了后代。这些结果表明，即使在干冰上运输后，受精能力仍保持不变。此外，还从睾丸和附睾来源的精子、细长精子细胞和圆形精子细胞中获得了在-80℃冷冻保存一年的后代，表明该方法也可以用于长期保存。此外，当他们使用在-20°C冷冻保存15年的小鼠个体解冻后收集的睾丸精子进行显微授精时，从两个品系中总共获得了27个后代。经证实，这些后代成熟后形态正常，具有正常的繁殖能力。这些结果表明，目前的冷冻方法可以简单、安全地冷冻保存雄配子，并可以使用干冰进行运输。换句话说，即使没有冷冻技术或液氮，冷冻保存也是可能的，这是一项有用的技术，可以通过将后代运送到具有显微授精技术的实验室来获得后代。此外，由于产仔是用冷冻个体的精子获得的，因此有可能通过收集睡在永久冻土中的灭绝动物的精子和相关物种的微授精卵来获得产仔。