Elucidation of the substrate supplying system in Toxoplasma gondii specific GTP-PK

弓形虫特异性 GTP-PK 底物供应系统的阐明

• 批准号: 23590494
• 负责人: ASAI TAKASHI
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23590494/
• 关键词: トキソプラズマ; ピルビン酸キナーゼII; ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ; GDP-PK; PEPCK; 寄生原虫; ミトコンドリア; ピルビン酸キナーゼ; 大腸菌での発現; アピコプラスト; 細胞内小器官での局在

A pyruvate kinase II in mitochondria and apicoplast of Toxoplasma gondii has not been known its physiological function. To understand the physiological function of this enzyme, the substrate supplying system of this enzyme was investigated. For the first time, a production of two recombinant PEPCKs was studied. The genes of enzymes were produced by PCR using a cDNA of RH strain of T. gondii and reconstituted into a protein producing plasmid pGEX. Type I gene of PEPCK was recognized, however, type II gene was completely recognized. After several trials to other protein producing plasmid (pET etc.), we found that pCold TF plasmid producing a protein at low temperature could produce the type I recombinant PEPCK as a GST-fusion protein. Since type II PEPCK gene could not been obtained by PCR, we tried several PCR techniques (Taq polymerase, annealing Tm, thermal cycler, etc.). Finally, type II gene was obtained.

线粒体中的丙酮酸激酶II和弓形虫弓形虫的apicoplast尚不知道其生理功能。为了了解该酶的生理功能，研究了该酶的底物供应系统。首次研究了两个重组PEPCK的生产。 酶的基因是使用T. gondii的Rh菌株的PCR产生的，并重构为产生质粒PGEX的蛋白质。 识别PePCK的I型基因，但是，II型基因被完全识别。 在对其他产生质粒（PET等）的蛋白质进行了几次试验之后，我们发现在低温下产生蛋白质的PCOLD TF质粒可以产生I型重组PEPCK作为GST融合蛋白。 由于无法通过PCR获得II型PEPCK基因，因此我们尝试了几种PCR技术（TAQ聚合酶，退火TM，热循环器等）。 最后，获得了II型基因。

项目成果

トキソプラズマミトコンドリアでのPEP供給源の検索

寻找弓形虫线粒体中的 PEP 来源

• 发表时间: 2012
• 作者: 浅井隆志;坪井絵莉子;今田美穂子;神川龍馬;橋本哲男
• 通讯作者: 橋本哲男

トキソプラズマ脳炎のPCR検査法

弓形虫脑炎PCR检测方法

• 发表时间: 2013
• 期刊: Clin Neuro
• 作者: Meng Feng;Junlong Cai;Bin Yang;Yongfeng Fu;Xiangyang Min;Hiroshi Tachibana;Xunjia Cheng;浅井隆志
• 通讯作者: 浅井隆志

ワークショップ導入セッション、トキソプラズマ症の現状と問題点

工作坊介绍环节，弓形体病现状及问题

• 发表时间: 2013
• 作者: 前田卓哉;三木田馨;坂本直也;加藤康幸;小野岳史;中村ふくみ;浅井隆志;古賀道子;丸山治彦;宮平靖;川名明彦;大西健児;味澤篤;木村幹男
• 通讯作者: 木村幹男

鞭虫症

鞭虫病

• 发表时间: 2013
• 期刊: 感染症症候群
• 作者: Umeda;T.;Tanaka;N.;Kusakabe;Y.;Nakanishi;M.;Kitade;Y.;& Nakamura;K.T.;浅井隆志
• 通讯作者: 浅井隆志

蟯虫症

蛲虫病

• 发表时间: 2013
• 期刊: 感染症症候群
• 作者: 峯尾松一郎;新倉 保;井上信一,井上愛美,黒田雅彦,小林富美惠;浅井隆志
• 通讯作者: 浅井隆志