網膜虚血傷害発生におけるpH感受性陽イオンチャンネルの病態的意義に関する研究

pH敏感阳离子通道在视网膜缺血性损伤发生发展中的病理意义研究

基本信息

批准号：
16791058
负责人：
西脇晶子
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

1)pH感受性陽イオンチャンネル(ASIC:acid-sensing ion channel)遺伝子ファミリーについて(現在、ASIC1a、ASIC1b、ASIC2a、ASIC2b、ASIC3、ASIC4が同定されている。)ラット網膜における分布をin situ hybridization法を用いて検討した。また、タンパクレベルにおける発現パターンを、検索した。2)pH感受性陽イオンチャンネル遺伝子ノックアウトマウス網膜の組織形態学的変化を検討し、また網膜電図を用いて視機能検査を詳細に行った。3)ラット網膜虚血再還流モデルにおいて、既知のpH感受性陽イオンチャンネル遺伝子ファミリー遺伝子の発現の変化を、RT-PCR法、Northern blot法、Western blot法を用いて検討した。4)アミロライド等pH感受性陽イオンチャンネル遺伝子阻害剤を虚血後硝子体内に注入し、網膜組織傷害の抑制効果を組織化学的に検討した。5)pH感受性陽イオンチャンネル遺伝子ノックアウトマウスに網膜虚血再灌流を負荷し、正常マウスとの反応の差違を組織形態学的に検索を行った。6)pH感受性陽イオンチャンネル遺伝子ファミリーの網膜虚血後の発現誘導・抑制に関与している遺伝子群を単離・解析するために、pH感受性陽イオンチャンネル遺伝子阻害剤を虚血後投与した網膜と投与しない網膜からmRNAを抽出しDNAマイクロアレイを用いて、発現の変化している遺伝子を同定した。さらに、実際にpH感受性陽イオンチャンネル遺伝子と相互作用するかどうか、免疫沈降法をはじめとする生化学的手法を使って探索している。

1)对于酸敏感离子通道(ASIC)基因家族(目前已鉴定出ASIC1a、ASIC1b、ASIC2a、ASIC2b、ASIC3和ASIC4)，我们通过原位杂交方法确定了大鼠视网膜中的分布。使用我们还在蛋白质水平上寻找表达模式。 2）我们研究了pH敏感的阳离子通道基因敲除小鼠视网膜的组织形态学变化，并使用视网膜电图进行了详细的视功能测试。 3)在大鼠视网膜缺血再灌注模型中，使用RT-PCR、Northern印迹和Western印迹研究已知pH敏感阳离子通道基因家族基因的表达变化。 4)将阿米洛利等pH敏感性阳离子通道基因抑制剂注射到缺血后的玻璃体内，组织化学检查其对视网膜组织损伤的抑制作用。 5)对pH敏感的阳离子通道基因敲除小鼠进行视网膜缺血再灌注，并通过组织形态学研究与正常小鼠的反应差异。 6)为了分离和分析参与视网膜缺血后pH敏感阳离子通道基因家族表达诱导和抑制的基因组，我们提取了缺血后用pH敏感阳离子通道基因抑制剂处理的视网膜。来自未经相同处理的视网膜的 mRNA，并使用 DNA 微阵列来识别表达发生变化的基因。此外，我们正在使用包括免疫沉淀在内的生化方法来研究它是否确实与 pH 敏感的阳离子通道基因相互作用。