結核菌の細胞内寄生性を標的にした新規結核治療法の開発

开发针对结核分枝杆菌细胞内寄生的结核病治疗新方法

基本信息

批准号：
16790064
负责人：
伊藤佐生智
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Hoshi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

p57は免疫細胞に特異的に発現するアクチン結合タンパク質であり,食作用をはじめとする細胞運動に関与していると考えられている.我々は白血球の貪食の際にp57がF-アクチンとともにファゴソームに集積し,ファゴソームの成熟に先行してファゴソーム膜から解離すること,p57はこの過程において一過性にリン酸化されることを見出している.一方,細胞内寄生菌である結核菌はp57のファゴソームからの解離を抑制してファゴソーム成熟を抑制し,細胞内での生存を可能にしているという報告があり,p57とアクチン細胞骨格系との相互作用の解析は細胞内寄生菌の生存機構の解明とこれを標的とした細胞内寄生菌感染症の新規治療法の開発に寄与すると考えられる.p57はN末端のWDリピート領域とC末端のロイシンジッパーを含むコイルドコイル領域からなる.WDリピート領域中には少なくとも2ヶ所アクチン結合能が存在し,一方でコイルドコイル領域は二量体形成に関与していることを明らかにしている.今年度の研究においてp57のリン酸化状態と細胞骨格系への結合の関係を検討するため,HL60細胞より調整した界面活性剤不溶性の細胞骨格成分へのp57の分布を検討したところ,PMA処理によりp57は細胞骨格から解離し,リン酸化の抑制により細胞骨格への結合が促進された.このことはGFP-p57強制発現細胞においても示された.また細胞骨格に結合しているp57のリン酸化状態を二次元電気泳動により解析した結果,細胞骨格結合性のp57は低リン酸化型であり,可溶性のp57は高リン酸化型であることが示された.我々は以前にp57が二量体形成することによりアクチンの架橋形成を媒介することを見出している.今回の結果よりp57は二量体形成とリン酸化による調節を介してファゴソームの形成と成熟におけるアクチン細胞骨格の再構成の調節を担っている可能性が示された.

p57 是一种肌动蛋白结合蛋白，在免疫细胞中特异性表达，被认为参与细胞运动，包括吞噬作用。我们发现 p57 在吞噬体成熟之前从吞噬体膜上解离，并且 p57 在此过程中短暂磷酸化抑制。据报道，p57抑制吞噬体成熟并实现细胞内存活，分析p57与肌动蛋白细胞骨架系统之间的相互作用将有助于阐明细胞内寄生细菌的存活机制，并创建针对此的细胞内生真菌感染的新治疗方法。 p57 被认为有助于发育。p57 由 N 末端的 WD 重复区域和 C 末端含有亮氨酸拉链的卷曲螺旋区域组成。WD 重复区域在至少两个位置具有肌动蛋白结合能力。，而盘绕线圈区域在今年的研究中，我们从 HL60 细胞中制备了表面活性剂，以研究 p57 的磷酸化状态与其与细胞骨架系统 p 与不溶性细胞骨架成分的结合之间的关系。当我们检查 p57 的分布时，我们发现 PMA 处理导致 p57 从细胞骨架上解离，并且磷酸化的抑制促进了其与细胞骨架的结合，这在被迫表达附着于细胞骨架的 GFP-p57 的细胞中也显示出来。对细胞中p57的磷酸化状态进行二维电泳分析的结果表明，细胞骨架结合型p57是低磷酸化形式，而可溶性p57是通过p57的二聚化而高度磷酸化的形式。我们发现p57介导肌动蛋白交联的形成，结果表明p57可能通过二聚化和磷酸化性别调节在吞噬体形成和成熟过程中发挥调节作用。