人工胚中心反応系を用いた免疫記憶活性化分子の探索及び抗腫瘍B細胞療法の検証と応用

利用人工生发中心反应系统寻找免疫记忆激活分子及抗肿瘤B细胞疗法的验证与应用

• 批准号: 22700899
• 负责人: 野嶋 卓也
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22700899/
• 关键词: 腫瘍免疫; 長期生存形質細胞; 記憶B細胞; 胚中心反応; メラノーマ; 抗体医薬; 液性免疫

本研究では独自に開発した『in vitro記憶B細胞/長期生存型形質(LLP)細胞誘導系』を用い、記憶B細胞の性状解析、新規抗腫瘍療法の検討、及び新規抗体医薬品製造方法の検討を行った。1)本手法は、CD40LとBAFFを発現する3T3細胞(40LB細胞)とIL-4で数日培養したマウスB細胞をy線照射したマウスに移入することで、多量の誘導記憶B(iMB)細胞を構築することが出来る。誘導したHEL抗原特異的BCRを発現するiMB細胞は脾臓辺縁体に限局的に集積していたが、記憶T細胞存在下でHEL抗原を免疫するとほぼ全てのiMB細胞は赤脾髄に移動し抗体産生細胞へ分化した。すなわち記憶B細胞の即時応答性を保証する仕組みの一つとして、抗原補足が容易な脾臓辺縁洞近傍に局在することが重要であると考えられる。2)40LBとIL-4で数日培養したB細胞を、40LBとIL-21でさらに数日培養後マウスに移入するとLLP細胞となり生着する。そこでHEL抗原を細胞表面に発現するB16メラノーマ細胞(B16-mHEL)を作成し、誘導LLP細胞が恒常的に産生する抗HEL抗体による腫瘍抑制効果を調べた、その結果LLP細胞を移入した個体はB16-mHELメラノーマの肺転移が顕著に抑制された。よって適応症例によっては効果的な腫瘍抑制法となることが示唆された。3)極めて効率的にB細胞を増加させることが出来る本手法と、BCRシグナルがFasデスシグナルを抑制する機構を組み合わせ、末梢血B細胞集団から任意の抗原特異的B細胞を選別する手法の構築を試みた。そのためにFasLとmHELを発現させた40LB細胞(FL)を作成した。HEL抗原特異的なB細胞を1%含む培養B細胞をFL上で数時間培養すると、HEL特異的B細胞は最大80%にまで濃縮された。よって目的抗原を発現させたFL細胞を用いれば簡便に任意の抗原特異的B細胞を得られる事が示された(PCT出願)。

这项研究使用独立开发的“体外记忆B细胞/长期生存类型（LLP）细胞诱导系统”来分析记忆B细胞的性质，检查新型抗肿瘤治疗，并检查了生产新抗体药物的方法。 1）此方法允许通过将CD40L和BAFF培养几天的小鼠B细胞转移到用Y射线照射的小鼠中来构建大量可诱导记忆B（IMB）细胞。表达诱导HEL抗原特异性BCR的IMB细胞局部积聚在脾脏边缘，但是在记忆T细胞存在下用HEL抗原免疫时，几乎所有IMB细胞几乎所有IMB细胞都迁移到红色脾浆中并分化为抗体产生的细胞。换句话说，人们认为，保证记忆B细胞立即响应的一种机制对于位于边缘脾鼻窦的位置很重要，而在边缘脾鼻窦附近，抗原补充很容易。 2）用40磅和IL-4培养几天的B细胞用40磅和IL-21培养几天几天，然后转移到小鼠中以形成LLP细胞并植入。因此，制备了在细胞表面表达HEL抗原的B16黑色素瘤细胞（B16-MHEL），并研究了由诱导的LLP细胞组成性产生的抗HEL抗体的肿瘤抑制作用。结果，用LLP细胞转移的个体在肺部黑色素瘤中被显着抑制。因此，已经提出某些指示可能是有效的肿瘤抑制方法。 3）我们试图创建一种结合当前技术的方法，该方法允许极有效的B细胞增加B细胞，以及BCR信号抑制FAS死亡信号的机制，并从外周血B细胞群中选择任何抗原特异性B细胞。为此，制备了表达FASL和MHEL的40磅细胞（FL）。在FL上培养含有1％HEL抗原特异性B细胞的培养的B细胞几个小时，并将HEL特异性B细胞富集至80％。因此，已经表明，通过使用表达靶抗原的FL细胞（PCT应用），可以轻松获得任何抗原特异性B细胞。

项目成果

T-cell dependent IgG1 B-cell memory is not activated, but tolerized, on binding eith T-cell independent type II antigen.

T 细胞依赖性 IgG1 B 细胞记忆在结合 T 细胞非依赖性 II 型抗原时不会被激活，而是被耐受。

• 发表时间: 2010
• 作者: Kei Haniuda;Takuya Nojima;Daisuke Kitamura
• 通讯作者: Daisuke Kitamura

The germinal center-like culture system revealed that IL-21 reversibly inhibits memory-B-cell generation in vitro

生发中心样培养系统揭示 IL-21 可逆地抑制体外记忆 B 细胞的生成

• 发表时间: 2010
• 作者: 井上正広;高橋信;Takuya Nojima
• 通讯作者: Takuya Nojima

抗原特異的B細胞集団の製造方法

产生抗原特异性B细胞群的方法

• 发表时间: 2009

A mouse model for a new cancer therapy using germinal center-like B cells generated in vitro

使用体外产生的生发中心样 B 细胞进行新癌症治疗的小鼠模型

• 发表时间: 2010
• 作者: Tatsuya Moutai

Role of IL-21 in memory-versus-plasma cell fate decision of germinal center B cells induced in vitro

IL-21在体外诱导的生发中心B细胞记忆与浆细胞命运决定中的作用

• 发表时间: 2010
• 作者: Kitano;M. and Okada;T;Takuya Nojima
• 通讯作者: Takuya Nojima