大腸がんにおける遺伝子発現異常の分子機構と意義

结直肠癌基因异常表达的分子机制及意义

• 批准号: 22700874
• 负责人: 西村 教子
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22700874/
• 关键词: EHF; p53; 大腸がん

我々はこれまでに、細胞のがん化に伴い遺伝子発現パターンに劇的な変化が生じる機構と意義を解析し、ヒト大腸癌細胞はEHFを高発現することにより、p53依存性のアポトーシスを回避していることを見出した。本研究では、EHFが大腸癌で高発現する分子機構、p53の機能を抑制する分子機構を明らかにすることを目的としている。まず、EHFの発現を制御する因子を探索するために、転写因子を中心としたRNAiライブラリーを用いて、網羅的なRNAiスクリーニングを行った。結果、大腸がん細胞において、転写因子であるFOSL1やヒストンメチル化に関与するMLL2やASH2LなどがEHFの発現を制御していることが明らかとなった。さらに、ChIP法を用いて、EHFプロモーターへの直接結合を確認したところ、FOSL1がEHFのプロモーター上に直接結合していることが明らかとなった。今後、MLL2とASH2LのEHFプロモーターへの結合をそれぞれ確認すると共に、ヒストンメチル化によるEHFの発現制御機構の解明を行いたいと考えている。次に、EHFの発現抑制によるアポトーシス誘導機構の解明を行うために、p53発現について検討したところ、EHFの発現抑制によってp53タンパク質が安定化することが明らかとなった。さらに、EHFの発現を抑制することによってMDM2の発現量が減少すること、EHFを強制発現するとMDM2の発現量が劇的に増加することが明らかとなった。このとき、EHFの発現抑制、及び強制発現によって、MDM2のmRNAレベルは変化しないことが明らかとなった。これまでの研究により、MDM2はユビキチンライゲースであり、p53タンパク質の安定化に寄与していることが明らかとなっている。そこで我々は、EHFはMDM2を介してp53タンパク質の安定化に寄与し、大腸がん細胞におけるアポトーシスの制御を行っていると考え、EHFとMDM2の免疫沈降実験を行った。その結果、EHFとMDM2は直接結合することが明らかとなった。今後は、EHFによるMDM2タンパク質の安定化機構の解明を行うことにより、EHFがp53の機能を抑制する分子機構を明らかにする。

我们已经分析了随着细胞的癌性，基因表达模式的急剧变化的机制和意义，发现人结肠癌细胞通过表达高EHF来避免p53依赖性凋亡。这项研究旨在阐明在结肠癌中高度表达EHF的分子机制以及抑制p53功能的分子机制。首先，使用以转录因子为中心的RNAi库进行全面的RNAi筛选，以搜索调节EHF表达的因素。结果，揭示了与结肠癌细胞中组蛋白甲基化控制EHF表达相关的转录因子，例如FOSL1和MLL2和ASH2L。此外，使用芯片方法证实了与EHF启动子的直接结合，并发现FOSL1直接与EHF的启动子结合。将来，我们想确认MLL2和ASH2L与EHF启动子的结合，并阐明通过组蛋白甲基化调节EHF表达的机理。接下来，为了通过抑制EHF表达来阐明凋亡诱导的机制，研究了p53表达，并发现抑制EHF表达的p53表达稳定了p53蛋白。此外，揭示了抑制EHF表达的降低了MDM2的表达水平，并且强迫EHF表达显着增加了MDM2的表达水平。目前，据揭示了EHF表达和强制表达的抑制没有改变MDM2的mRNA水平。先前的研究表明，MDM2是一种泛素连接酶，有助于p53蛋白的稳定。因此，我们认为EHF通过MDM2有助于p53蛋白的稳定，并调节结肠癌细胞中的凋亡，并进行了EHF和MDM2的免疫沉淀实验。结果，揭示了EHF和MDM2直接结合。将来，我们将通过阐明EHF稳定MDM2蛋白的机制来阐明EHF抑制p53功能的分子机制。

项目成果

Activity-dependent ubiquitination of the AMPA receptor subunit GluA2.

• DOI: 10.1523/jneurosci.5944-10.2011
• 发表时间: 2011-02-23
• 期刊: The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience
• 作者: Lussier MP;Nasu-Nishimura Y;Roche KW
• 通讯作者: Roche KW