Expansion of the amino acid repertoire in protein biosynthesis of the domesticated silkworm, Bombyx mori

家蚕（Bombyx mori）蛋白质生物合成中氨基酸库的扩展

• 批准号: 22658019
• 负责人: TERAMOTO Hidetoshi
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: National Institute of Agrobiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22658019/
• 关键词: 昆虫; カイコ; 蛋白質; バイオテクノロジー; 非天然アミノ酸

Mutants of phenylalanyl-tRNA synthetase derived from the domesticated silkworm, Bombyx mori, recognizing phenylalanine(Phe) analogues(unnatural amino acids) as a substrate were generated by introducing point mutations into its amino acid binding pocket. The recognition capacity of the mutants toward several Phe analogues was elucidated in vitro, and the incorporation of Cl-Phe, one of Phe analogues, into protein biosynthesis in the cultured cells of B. mori overexpressing a PheRS mutant was verified. Moreover, a gene encoding methionyl-tRNA synthetase(MetRS) was cloned from B. mori and its complete cDNA sequence was clarified, and the recognition capacity of its mutants, generated by point mutation strategy similar to PheRS, toward methionine(Met) analogues was investigated in vitro.

通过在其氨基酸结合口袋中引入点突变，产生了源自家蚕 Bombyx mori 的苯丙氨酰-tRNA 合成酶突变体，其识别苯丙氨酸 (Phe) 类似物（非天然氨基酸）作为底物。体外阐明了突变体对几种 Phe 类似物的识别能力，并验证了 Phe 类似物之一 Cl-Phe 掺入过表达 PheRS 突变体的家蚕培养细胞中的蛋白质生物合成。此外，从家蚕中克隆了编码甲硫氨酰-tRNA合成酶（MetRS）的基因，并阐明了其完整的cDNA序列，并通过类似于PheRS的点突变策略产生了其突变体对甲硫氨酸（Met）类似物的识别能力。体外研究。

项目成果

非天然アミノ酸をタンパク質合成系へ取り込むカイコ培養細胞の作出

创建将非天然氨基酸纳入蛋白质合成系统的培养蚕细胞

• 发表时间: 2011
• 作者: Tokuda;G.;Kihara;K.;Tsuboi;Y.;Moriya;S. & Kikuchi;J.;寺本英敏;徳田岳;寺本英敏,小島桂,梶原英之,石橋純;寺本英敏;寺本英敏
• 通讯作者: 寺本英敏

カイコのタンパク質合成におけるアミノ酸レパートリーの拡張

蚕蛋白合成中氨基酸库的扩展

• 发表时间: 2012
• 作者: Tokuda;G.;Kihara;K.;Tsuboi;Y.;Moriya;S. & Kikuchi;J.;寺本英敏
• 通讯作者: 寺本英敏

非天然アミノ酸をタンパク質合成系に取り込むカイコ培養細胞の作出

创建将非天然氨基酸纳入蛋白质合成系统的培养蚕细胞

• 发表时间: 2011
• 作者: Tokuda;G.;Kihara;K.;Tsuboi;Y.;Moriya;S. & Kikuchi;J.;寺本英敏;徳田岳;寺本英敏,小島桂,梶原英之,石橋純;寺本英敏
• 通讯作者: 寺本英敏

Expansion of the amino acid repertoire in protein biosynthesis in silkworm cells

蚕细胞蛋白质生物合成中氨基酸库的扩展

• 发表时间: 2012
• 期刊: ChemBioChem
• 影响因子: 3.2
• 作者: Teramoto H;Kojima K;Kajiwara H;Ishibashi J
• 通讯作者: Ishibashi J

Generation of a Bombyx mori phenylalanyl-tRNA synthetase mutant with relaxed amino acid specificity

具有宽松氨基酸特异性的家蚕苯丙氨酰-tRNA合成酶突变体的产生

• 发表时间: 2010
• 作者: Teramoto H;Kojima K
• 通讯作者: Kojima K