EBV潜伏感染Bリンパ球細胞株における溶解感染誘導と宿主細胞周期制御機構の解析

EBV潜伏感染B淋巴细胞系裂解感染诱导及宿主细胞周期调控机制分析

基本信息

批准号：
04J05815
负责人：
工藤あゆみ
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

Epstein-Barr Virus(EBV)が潜伏感染するがん細胞でウイルス産生感染へ移行すると、RB蛋白質は高リン酸化状態になりCyclinA(E)/CDK2の活性が維持されウイルスゲノム合成に適したS期様細胞環境となる。しかし宿主DNA複製は停止する。宿主DNA複製開始のライセンス化はMCM複合体を含む複製開始複合体群が複製開始点付近に結合し行われている。このライセンス化は主に4つの標的(ORC,Cdc6,Cdt1,MCM)がリン酸化を受け阻害される。MCM複合体はMCM2-7までの6つのサブユニットから構成され、特にMCM4-6-7からなる3量体にはDNA Helicase(unwind)活性があることが知られる。我々はEBV溶解感染進行に伴いMCM4の不活化部位(Thr-19,Thr-110)がリン酸化されることを見出した。このリン酸化はEBVBGLF4蛋白質キナーゼによってin vitroでもHeLa細胞での単独発現系でも起きることが解った。また、HeLa細胞へのトランスフェクション解析の結果BGLF4タンパク質発現は細胞増殖を抑えた。MCM4-6-7から構成される6量体の持つDNAヘリカーゼ活性はBGLF4蛋白質共存在化では抑制された。以上から、EBV溶解感染期にBGLF4蛋白質がMCM4をリン酸化しMCM複合体を不活化することで、宿主DNA複製開始が阻害されることが示唆された。

当EB病毒（EBV）在潜伏感染的癌细胞中转变为产病毒感染时，RB蛋白变得高度磷酸化，维持CyclinA（E）/CDK2活性并进入适合病毒基因组合成的S期。在类似细胞的环境中。然而，宿主 DNA 复制停止。宿主DNA复制起始的许可是由一组复制起始复合物（包括MCM复合物）在复制起点附近结合来实现的。这种许可主要受到四个靶标（ORC、Cdc6、Cdt1 和 MCM）磷酸化的抑制。 MCM 复合物由六个亚基 MCM2-7 组成，尤其已知由 MCM4-6-7 组成的三聚体具有 DNA 解旋酶（解旋）活性。我们发现，随着 EBV 裂解性感染的进展，MCM4 的失活位点（Thr-19、Thr-110）被磷酸化。在体外和 HeLa 细胞的单一表达系统中发现这种磷酸化是由 EBVBGLF4 蛋白激酶引起的。此外，对 HeLa 细胞的转染分析结果显示，BGLF4 蛋白表达抑制了细胞增殖。由MCM4-6-7组成的六聚体的DNA解旋酶活性在BGLF4蛋白的共存下受到抑制。这些结果表明，BGLF4 蛋白在 EBV 裂解感染过程中磷酸化 MCM4 并使 MCM 复合物失活，从而抑制宿主 DNA 复制起始。