卵丘細胞から分泌されるプロジェステロンの減数分裂再開能に関する研究

卵丘细胞分泌的孕酮恢复减数分裂能力的研究

基本信息

批准号：
04J05263
负责人：
山下泰尚
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

近年,性腺刺激ホルモンの刺激によりEGF-like growth factor(Amphiregulin; AREG, Epiregulin; EREG)が順粒層細胞および卵丘細胞において発現し,EGF受容体を介してparacrine的あるいはautocrine的に卵丘細胞を刺激し,卵丘細胞の膨潤を誘起させることが報告された.AREG, EREGの分泌には,proteaseによる修飾が必要であるが,排卵過程において,AREGおよびEREGを切断・分泌させるproteaseに関する報告はこれまで全く無い.近年,マウスは胚性幹細胞においてADAM17IがAREGおよびEREGを細胞膜表面から切断させることが報告された.我々は,マウス卵丘細胞のマイクロアレイ解析からADAM17が排卵過程に発現していることを見出したことから,ブタ卵丘細胞卵子複合体(COCs)の体外培養系を用いて,卵丘細胞における詳細な役割を検討した.ブタCOCsをFSH+LH添加培地で培養し,ADAM17発現量と活性値を検出した結果,ADAM17発現は,培養10時間後から有意に増加し,40時間まで維持していた.活性値も同様の傾向を示した.FSH+LH添加培地にADAM17阻害剤(TAPI-2)を添加して培養すると,FSH, LHにより誘起される高い活性は,TAPI-2により完全に抑制され,AREGおよびEREGにより活性化されるERK1/2,卵丘細胞の膨潤が低下された.さらに,ラット順位層細胞(GC)に4dam]7siKNAを導入すると,Adam17siRNAは,FSHにより誘導されるERK1/2のリン酸化を抑制したこと,活性型AREGの添加によりその抑制は回復したことから,ADAM17の発現が,EGF-like growth factorを活性型へと変化させ,EGF受容体を刺激する結果,卵丘細胞の膨潤が誘起されることが明らかとなった.

近年来，EGF样生长因子(Amphiregulin；AREG，Epiregulin；EREG)因促性腺激素刺激而在颗粒细胞和卵丘细胞中表达，并且通过EGF受体以旁分泌或自分泌方式在卵丘细胞中表达。据报道，AREG 刺激卵丘细胞并诱导卵丘细胞肿胀。 EREG的分泌需要蛋白酶的修饰，但迄今为止还没有关于在排卵过程中裂解并分泌AREG和EREG的蛋白酶的报道。通过微阵列分析，有报道称ADAM17是从细胞膜表面裂解的。在小鼠卵丘细胞中，我们发现 ADAM17 在排卵过程中表达。因此，我们使用猪卵丘细胞-卵复合物（COC）的体外培养系统来研究其在卵丘细胞中的详细作用。将猪COC在添加FSH+LH的培养基中培养，并研究ADAM17表达和活性值检测结果是，A.培养10小时后DAM17表达显着增加，并维持至40小时。培养时FSH、活性值也表现出类似的趋势。 LH诱导的高活性被AREG和EREG激活的TAPI-2、ERK1/2完全抑制，并且卵丘细胞的肿胀减少4dam]7si。当引入 KNA 时，Adam17siRNA 抑制 FSH 诱导的 ERK1/2 磷酸化，而添加活性 AREG 可恢复这种抑制。研究表明，通过将生长因子转化为活性形式并刺激 EGF 受体，可诱导卵丘细胞肿胀。