ウシおよびブタ未成熟卵母細胞の新規凍結保存法と凍結障害卵母細胞の救助法の開発

牛、猪未成熟卵母细胞冷冻保存新方法及冷冻损伤卵母细胞抢救方法的开发

基本信息

  • 批准号:
    04J03323
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.22万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2004
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2004 至 2005
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

ウシおよびブタの卵巣内に数多く存在している卵母細胞を有効利用するために,未成熟卵母細胞の凍結保存法の改良,および凍結障害を受けた卵母細胞の救助法の開発を行った。凍結法には短時間で簡便に処理できるガラス化法を用いた。ガラス化法では,細胞毒性のある高濃度の凍結保護物質に暴露することが必要で,その毒性や浸透圧の影響を軽減することがその後の生存に重要である。その方法として,低濃度の凍結保護物質から徐々に高濃度のものに暴露する方法を用い,ウシ凍結卵母細胞由来の個体作出に成功した。その成果を原著論文としてまとめ,Biology of Reproductionに掲載されている。また,凍結卵母細胞の発生能と卵細胞質内の活性型ミトコンドリアの関係を解析し,その成果を第106回畜産学会において発表を予定している。ブタのガラス化保存においては,卵細胞質内に多く含まれる脂質粒が主要な凍結障害の要因である。その脂質粒をガラス化前に除去することが,保存後の生存性の向上につながる。しかし,マイクロマニュピレーターを用いて脂質粒を除去する際に卵母細胞が損傷する可能性が高い。そこで,糖を添加した溶液中で卵母細胞を遠心することで脂質粒を卵母細胞から分離し,その除去を簡便にする方法を開発した。その成果を原著論文としてまとめ,Cryobiologyに掲載されている。また,凍結障害を受けた卵母細胞の救助法として,凍結後の卵母細胞の核をマイクロマニュピレーターで取り出し,未凍結の卵母細胞へ注入する卵核胞置換法を行った。また,凍結障害を回避するために,卵核胞置換技術を用い,卵母細胞から取り出した核のみを凍結する方法を開発した。その成果を,第46回哺乳動物卵子学会で発表し学術奨励賞を受賞した。
为了有效利用牛和猪卵巢中存在的大量卵母细胞,我们改进了未成熟卵母细胞的冷冻保存方法,开发了遭受冷冻损伤的卵母细胞的拯救方法。对于冷冻方法,我们使用玻璃化方法,该方法快速且易于处理。玻璃化需要暴露于高浓度的细胞毒性冷冻保护剂,降低毒性和渗透压的影响对于随后的生存很重要。作为实现此目的的方法,我们通过将冷冻牛卵母细胞逐渐暴露于从低浓度到高浓度的冷冻保护剂中,成功地从冷冻牛卵母细胞中培育出个体。结果被总结为原始论文并发表在《生殖生物学》上。我们还将分析冷冻卵母细胞的发育潜力与卵母细胞胞质中活跃线粒体之间的关系,并计划在日本动物学会第106届年会上展示该结果。在猪的玻璃化保存中,卵细胞质中丰富的脂质颗粒是造成冻害的主要原因。在玻璃化之前去除脂质颗粒可以提高储存后的存活率。然而,使用显微操作器去除脂质颗粒时,卵母细胞很可能会受到损伤。因此,我们开发了一种通过在添加糖的溶液中离心卵母细胞来从卵母细胞中分离脂质颗粒并简化其去除的方法。结果被总结为原始论文并发表在 Cryobiology 上。此外,作为遭受冷冻损伤的卵母细胞的拯救方法,我们进行了卵泡置换法,即使用显微操作器去除冷冻卵母细胞的细胞核,并将其注射到未冷冻的卵母细胞中。此外,为了避免冷冻损伤,我们开发了一种使用卵泡置换技术仅冷冻从卵母细胞中取出的细胞核的方法。研究结果在第46届哺乳动物卵学学会上发表,并获得了学术鼓励奖。

项目成果

期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Vitrification of germinal vesicle stage oocytes
生泡期卵母细胞的玻璃化冷冻
  • DOI:
  • 发表时间:
    2004
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Yasuyuki ABE; et al.
  • 通讯作者:
    et al.
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  • 通讯作者:
    福本 学
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2014
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    山城 秀昭;阿部 靖之;桑原 義和;漆原 佑介;鈴木 正敏;トウ ビン;瀧野 祥生;菅野 有晃;岩島 玲奈;大段 隆史;藤 晋一;木野 康志;福田 智一;磯貝 恵美子;福本 学
  • 通讯作者:
    福本 学
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