The study of molecular mechanism of hepatitis C virusproduction

丙型肝炎病毒产生的分子机制研究

基本信息

批准号：
22590731
负责人：
SHOJI Ikuo
金额：
$ 2.25万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

项目摘要

Development of HCV replicon cells and HCV production system using HCV JFH1 strain enabled us to investigate the whole life cycle of HCV and the host factors essential for HCV production. In this study, we aimed to clarify molecular mechanism of HCV production by investigating binding partners for HCV proteins. We analyzed HCV core-binding proteins, hnRNPH1/H2/F. Addition of HCV RNA inhibited the binding between the core protein and hnRNPs. RNase recovered this inhibition. Theseresults suggest that RNA is required for the interaction between the core protein and hnRNPs. Our results suggest that these hnRNPH and hnRNPF cooperatively regulate HCV replication. We then identified HCV NS5A-binding proteins, ubiquitin ligase p138, transcription factor HNF-1a, and histone methyltransferase SMYD3. The p138 protein bound NS5A protein, but not other HCV proteins. Our data suggest that p138 protein promotes ubiquitylation of NS5A protein and enhances its proteasomal degradation, suggesting that p138 regulates HCV replication. We analyzed the p138-binding domain on the NS5A protein using a series of deletion mutants. Then weanalyzed the ubiquitylation site on the NS5A protein using 13 point-mutants. These studies would contribute to the better understanding of HCV life cycles as well as the viral pathogenesis.

使用HCV JFH1菌株开发HCV复制子细胞和HCV生产系统，使我们能够研究HCV的整个生命周期以及HCV生产必不可少的宿主因素。在这项研究中，我们旨在通过研究HCV蛋白的结合伙伴来阐明HCV产生的分子机制。我们分析了HCV核结合蛋白HNRNPH1/H2/f。 HCV RNA的添加抑制了核心蛋白和HNRNP之间的结合。 RNase恢复了这种抑制作用。这些疾病表明核心蛋白与HNRNP之间相互作用是必需的。我们的结果表明，这些HNRNPH和HNRNPF协同调节HCV复制。然后，我们确定了HCV NS5A结合蛋白，泛素连接酶P138，转录因子HNF-1A和组蛋白甲基转移酶SMYD3。 p138蛋白结合的NS5A蛋白，但没有其他HCV蛋白。我们的数据表明，P138蛋白促进NS5A蛋白的泛素化并增强其蛋白酶体降解，这表明P138调节HCV复制。我们使用一系列缺失突变体分析了NS5A蛋白上的p138结合域。然后使用13点突变剂在NS5A蛋白上进行了泛素化位点。这些研究将有助于更好地了解HCV生命周期以及病毒发病机理。

项目成果

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专利数量（0）

C型肝炎ウイルスNS5Aに結合するユビキチンリガーゼの同定

与丙型肝炎病毒 NS5A 结合的泛素连接酶的鉴定

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
岡田典子;勝二郁夫;甘翔;Deng L;姜大鵬;井出良浩;堀田博
通讯作者：
堀田博

Role of the proteasome pathways in the hepatitis Cvirus life cycle

蛋白酶体途径在丙型肝炎病毒生命周期中的作用

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
勝二郁夫、Ahmed El-Shamy;堀田博;Shoji I
通讯作者：
Shoji I

はじめの一歩のイラスト感染症・微生物学

传染病和微生物学的第一步说明

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
0
作者：
江口有一郎;兵庫秀幸;小野正文;勝二郁夫
通讯作者：
勝二郁夫

Sequence heterogeneity in NS5A of hepatitis C virus gentypes 2a and 2b and clinical outcome of pegylated-Interferon/Ribavirin therapy

丙型肝炎病毒基因型 2a 和 2b NS5A 的序列异质性以及聚乙二醇化干扰素/利巴韦林治疗的临床结果

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
PLoS One
影响因子：
3.7
作者：
El-Shamy;A.;Shoji;I.;Kim S-R.;Ide;Y-H.;Imoto;S.;Deng;L.;Yoon;S.;Fujisawa;T.;Tani;S.;Yano;Y.;Seo;Y.;Azuma;T.;and Hotta;H
通讯作者：
H

Identification of an E3 ubiquitin ligase that targets hepatitis C virus NS5A protein for ubiquitylation

鉴定针对丙型肝炎病毒 NS5A 蛋白进行泛素化的 E3 泛素连接酶