小腸放射線障害治療に向けて上皮細胞の分化と再生に関与する遺伝子の研究

小肠放射损伤治疗中上皮细胞分化与再生相关基因的研究

基本信息

批准号：
14780424
负责人：
上坂敏弘
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780424/
关键词：
crypt Cdx2 IEC-6 microarray E2F3 differentiation regeneration intestine Microarray HB-EGF 腸

项目摘要

主に腸で発現する転写調節因子Cdx2に着目し、Cdx2の標的遺伝子を明らかにしていくことによって、腸上皮細胞の細胞増殖、分化制御、さらには細胞死制御機構の解明と分化マーカーの同定を目指した。Cdx2の発現制御が可能なラット胎児由来未分化腸上皮細胞株IEC-6 Tet-Off/Cdx2を用いて、Cdx2の発現誘導に伴い転写促進もしくは転写抑制される遺伝子をオリゴヌクレオチド・マイクロアレイ(CodeLink UniSet Rat I Bioarray, Amersham)を用いて9,906種の遺伝子について調べた。現在23種類の遺伝子がCdx2によって発現上昇してくることをRT-PCRによって確認している。これらの内、ゲノム情報がわかっているものに関しては、プロモーター領域と予想される上流域においてCdx2結合部位配列(TTTAC/T)の検索を行った。この結果をもとに、ルシフェラーゼを用いたプロモーターアッセイ、ゲルシフトアッセイ、クロマチン沈降法を行い、Cdx2によって直接転写調節されることを確認した。これにより、転写調節因子E2F3、17β-hydroxysteroid dehydrogenase type 2、TM4SF4などがCdx2の標的遺伝子であることが示された。また、免疫組織化学的手法やin situ hybridizationにより、腸における発現分布を解析しているが、多くの遺伝子は、crypt上皮細胞で発現していることが明らかになってきた。本研究により同定されてきた遺伝子群の情報から、Cdx2の下流のシグナル伝達経路やcrypt上皮組織の新たな生理的役割が明らかになってきたので、さらなる解析を行いたい。また、TM4SF4は膜タンパクであり、crypt-villus部位から絨毛先端にかけて発現していることから、分化マーカーとして有用である可能性が高い。

通过关注主要在肠道表达的转录调节因子Cdx2，明确Cdx2的靶基因，阐明肠上皮细胞的细胞增殖和分化调控，阐明细胞死亡调控机制和分化鉴定。我瞄准了。使用能够控制Cdx2表达的大鼠胚胎未分化肠上皮细胞系IEC-6 Tet-Off/Cdx2，使用寡核苷酸微阵列(CodeLink UniSet)检测在诱导Cdx2表达时转录被促进或抑制的基因。使用 Rat I Bioarray (Amersham) 研究了 9,906 个基因。目前，我们通过RT-PCR证实了23种基因被Cdx2上调。其中，对于已知基因组信息的那些，我们在预测为启动子区域的上游区域中搜索了Cdx2结合位点序列（TTTAC/T）。基于该结果，我们使用荧光素酶、凝胶位移测定和染色质沉降法进行了启动子测定，并证实转录是由Cdx2直接调节的。这表明转录调节因子E2F3、17β-羟基类固醇脱氢酶2型、TM4SF4等是Cdx2的靶基因。我们还利用免疫组织化学技术和原位杂交分析了肠道中的表达分布，已经清楚许多基因在隐窝上皮细胞中表达。本研究中鉴定的基因簇信息揭示了Cdx2下游信号通路和隐窝上皮组织的新生理作用，因此我们希望进行进一步的分析。此外，由于TM4SF4是一种膜蛋白，并且从隐窝-绒毛区域到绒毛尖端表达，因此它可能可用作分化标记物。