活性化酸素種産生アントラサイクリンの発現誘導する遺伝子群の同定とその発現機序

诱导产生活性氧的蒽环类药物表达的基因鉴定及其表达机制

基本信息

批准号：
14771350
负责人：
柴倉美砂子
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

筆者らは、RC-K8ヒト悪性リンパ腫細胞株とH69ヒト小細胞肺癌細胞株において活性化酸素種を誘導するアントラサイクリン系抗癌剤ドキソルビシン(doxo)がウロキナーゼ(uPA)の発現を誘導することを報告した(Int J Cancer.93:792-797,2001)。マイクロアレイ法を用いてdoxo刺激により発現誘導される遺伝子の同定を行ったところ、uPA以外にIL-8遺伝子が強く誘導された。IL-8の抗原量及びmRNAの発現量ともに上昇していることをH69とSBC-1ヒト小細胞肺癌細胞の2つの細胞株で確認した。IL-8プロモーター領域結合CATレポーター遺伝子を用いた遺伝子導入実験やGel shift assayによりdoxo刺激によるIL-8の遺伝子発現上昇にはPEA3転写因子結合領域が重要であることが判明した。RNase protection assayにより新たにdoxoによりmonocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1)遺伝子発現上昇が生じることも判明した。これらの研究結果はInt J Cancer. (103:380-386,2003)に報告し、2003年9月2nd International Conference on Thrombosis and Hemostasis Issues in Cancer (Bergamo, Italy)にて口演発表した。doxo刺激によるTNF-αの発現誘導も証明され、各肺癌細胞におけるdoxoに対するサイトカイン及びケモカイン発現の相違についてCancer Chemother Pharmacol.(52:391-398,2003)に報告した。doxo刺激により活性化されるシグナル伝達経路をwestern blotにて同定し、H69細胞におけるIL-8発現に関与する経路を各MAPカイネース阻害剤にて検討したところ、これらの発現にはERK1/2が関与していることが判明した(論文投稿中)。マトリゲルチャンバーを用いた末梢血白血球浸潤活性にて、doxo刺激後のH69培養上清は優位に好中球や単球の浸潤活性を上昇させていることを確認し第65回日本血液学会総会にて発表した。新規アントラサイクリン系抗癌剤アムルビシンもdoxo同様にuPA、IL-8及びMCP-1を発現誘導することRT-PCRやELISAにて明らかにした。アムルビシンはdoxo強く遺伝子発現を誘導していたため、アムルビシン刺激後のH69細胞培養上清をウサギ皮下に投与したところ好酸球の優位な浸潤を認め、新たにeotaxin-3の発現誘導を確認した。

作者报道，阿霉素（doxo）是一种诱导活性氧的蒽环类抗癌药物，可诱导 RC-K8 人恶性淋巴瘤细胞系和 H69 人小细胞肺癌细胞系中尿激酶（uPA）的表达（Int. J Cancer.93:792-797,2001）。当我们使用微阵列方法鉴定doxo刺激诱导表达的基因时，我们发现除了uPA之外，IL-8基因也被强烈诱导。我们证实，在两种细胞系：H69 和 SBC-1 人小细胞肺癌细胞中，IL-8 的抗原水平和 mRNA 表达水平均增加。使用与 IL-8 启动子区域结合的 CAT 报告基因的基因转移实验和凝胶位移测定表明，PEA3 转录因子结合区域对于 doxo 刺激诱导的 IL-8 基因表达增加非常重要。 RNase 保护测定还表明，doxo 可以增加单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1) 基因的表达。这些研究结果发表在 Int J Cancer (103:380-386, 2003) 上，并于 2003 年 9 月在第二届癌症血栓和止血问题国际会议（意大利贝加莫）上口头发表。 Cancer Chemother Pharmacol (52:391-398, 2003) 还证实了 doxo 刺激可诱导 TNF-α 表达，并且每个肺癌细胞中对 doxo 反应的细胞因子和趋化因子表达存在差异。使用蛋白质印迹鉴定了 doxo 刺激激活的信号转导通路，并使用各种 MAP 激酶抑制剂检查了 H69 细胞中涉及 IL-8 表达的通路，结果表明它们参与其中（论文目前正在提交）。通过使用Matrigel室测试外周血白细胞浸润活性，我们证实doxo刺激后的H69培养物上清液主要增加了中性粒细胞和单核细胞的浸润活性。 RT-PCR和ELISA结果显示，新型蒽环类抗癌药物氨柔比星与doxo一样，可诱导uPA、IL-8和MCP-1的表达。由于氨柔比星强烈诱导doxo基因表达，因此当将用氨柔比星刺激的H69细胞的培养上清液皮下给予家兔时，观察到嗜酸性粒细胞的显着浸润，并且新证实了eotacin-3表达的诱导。