低濃度LPSに反応するB-1細胞のCD14を介したシグナル伝達経路の解析

B-1细胞响应低浓度LPS时CD14介导的信号转导通路分析

基本信息

批准号：
13770138
负责人：
杉山剛志
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Aichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

B-1細胞はいわゆる普通のB(B-2)細胞とは異なり、一般にT細胞非依存性に低親和性のIgMを産生し、自然免疫に関わるといわれている。TH2.52はLPSに反応してIgMや種々のサイトカインを産生するB細胞株であるが、我々はこの細胞株がB-1細胞の特徴を持つこと、さらに、CD14を発現しており、CD14依存的に低濃度LPSに反応しNF-κBの活性化、細胞増殖を起こすことを報告している。本研究ではこのTH2.52のLPS刺激応答におけるシグナル伝達とToll様受容体の発現、MAPKの活性化との関連について検討を行った。TH2.52のmRNAを抽出し、RT-PCRによりRP105、TLR4及びMD-1とMD-2の発現を調べたところ、これらすべての発現が確認された。ERK1/2はLPS濃度依存的にリン酸化され、さらに抗CD14抗体で細胞を処理した後LPSを加えるとERKのリン酸化は抑制された。SAPK/JNKについても同様の結果が得られた。以上の結果よりTH2.52においてLPSは膜型CD14依存的にMAPKを活性化することが明らかになった。さらに、我々はこのTH2.52がIFN-γ刺激によりマクロファージ様に形態変化を起こすことを見出し、その機構について解析を行った。IFN-γ刺激によりTH2.52は貪食能を持ち、Esterase陽性を示した。IFN-γを除去すると元来のTH2.52の形態へと戻った。インヒビター及びドミナントネガティブコンストラクトを用いた実験より、このマクロファージ化はp38MAPK依存的におこり、さらにIL-4がIFN-γ刺激によるp38のリン酸化を抑制することにより形態変化を抑制することが明らかとなった。これらの結果からTH1サイトカイン、TH2サイトカインによりB-1細胞株TH2.52の機能が制御されていることが示唆された。

与所谓的普通 B (B-2) 细胞不同，B-1 细胞通常以不依赖于 T 细胞的方式产生低亲和力 IgM，据说参与先天免疫。 TH2.52 是一种响应 LPS 产生 IgM 和各种细胞因子的 B 细胞系，但我们发现该细胞系具有 B-1 细胞的特征，并且它表达 CD14。据报道，NF-κB 活化与细胞有关。增殖以依赖性方式响应低浓度LPS而发生。在本研究中，我们研究了 TH2.52 响应 LPS 刺激的信号转导、Toll 样受体的表达和 MAPK 激活之间的关系。当提取TH2.52 mRNA并通过RT-PCR检查RP105、TLR4以及MD-1和MD-2的表达时，证实了所有这些的表达。 ERK1/2以LPS浓度依赖性方式磷酸化，并且当用抗CD14抗体处理细胞后添加LPS时，ERK磷酸化被抑制。 SAPK/JNK 也获得了类似的结果。上述结果表明，LPS在TH2.52以膜型CD14依赖性方式激活MAPK。此外，我们发现TH2.52在IFN-γ刺激下发生巨噬细胞样形态变化，并分析了其机制。 IFN-γ刺激后，TH2.52具有吞噬能力，且呈酯酶阳性。当 IFN-γ 被去除后，它恢复到原来的 TH2.52 形式。使用抑制剂和显性失活构建体的实验表明，这种巨噬细胞转化以 p38MAPK 依赖性方式发生，并且 IL-4 通过抑制 IFN-γ 刺激诱导的 p38 磷酸化来抑制形态变化。这些结果表明B-1细胞系TH2.52的功能受到TH1细胞因子和TH2细胞因子的调节。