キイロショウジョウバエPDF発現概日時計ニューロンのシナプス出力の解析

表达昼夜节律时钟神经元的果蝇 PDF 的突触输出分析

基本信息

批准号：
10J04064
负责人：
梅崎勇次郎
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は以下の結果を得た。1.PDFおよびUNTが温度同調に果たす役割を検討するため、Pdf欠損系統Pdf^0、UNTによる神経伝達を破傷風毒素(TNT)の特異的発現により阻害したPdf-gal4/uas-TNT-E(Pdf>TNT)、およびPdfを欠損しかつUNTの伝達を阻害したPdf-gal4/uas-TNT-E;Pdf^0(Pdf>TNT;Pdf^0)を用いて、恒暗下で温度サイクル(DD+TC)を与えて同調後、TCを6時間シフトして同調過程を調べた。その結果、1.野生型、Pdf^0では約3サイクル後に同調したのに対し、Pdf>TNTでは約8サイクル後に同調したことから、UNTは温度同調促進作用を有することが示唆された。また、Pdf>TNT;Pdf^0はピークが不明瞭ではあるが、高温期で示す活動が温度シフトとともに移行したことから、少なくとも温度同調は確認された。2.野生型、Pdf^0、Pdf>TNTを用いて、昼と夜または低温期と高温期の2ポイントで光同調および温度同調下での各時計細胞での時計タンパク質発現リズムを解析した結果、大きな変化は観察されなかった。今後、ポイント数を増やして詳細な解析を行う必要がある。3.UNTの候補の絞り込みを行う目的で、PDFニューロンで神経伝達物質合成酵素のノックダウン系統を作製し、Pdf>TNTのDD+TC下での特徴的な活動リズムを指標として解析した。その結果、GABA、Acetylcholine、Dopamine、Histamine、Serotonin、Glutamate合成酵素のノックダウン系統で同調までのサイクル数が約5サイクルに遅延したことから、これらがUNTに含まれる可能性が示唆された。今後、スクリーニングした上記の合成酵素のプロモーター配列を利用した形質転換体を用いてGFPを発現させる系統を作製し、PDF免疫染色と組み合わせることにより、伝達物質の同定を進める必要がある。

今年，我们取得了以下成果。 1. 为了研究 PDF 和 UNT 在温度夹带中发挥的作用，我们开发了 Pdf 缺陷菌株 Pdf^0 和 Pdf-gal4/uas-TNT-E（其中 UNT 的神经传递被破伤风毒素的特异性表达抑制（ TNT）），以及缺乏Pdf并抑制UNT传输的Pdf-gal4/uas-TNT-E;Pdf^0（Pdf>TNT;Pdf^0）在持续黑暗中进行温度循环（DD+TC）后，TC被夹带。轮班了 6 个小时来检查夹带过程。结果，1.在野生型和Pdf^0中，约3个循环后发生夹带，而在Pdf>TNT中，约8个循环后发生夹带，表明UNT具有促进温度夹带的作用。另外，虽然Pdf>TNT；Pdf^0的峰不清楚，但高温期间显示的活性随着温度变化而变化，因此至少确认了温度同步。 2.野生型、Pdf^0、Pdf>TNT在昼夜或低温、高温两个时间点分析各时钟细胞在光和温度夹带下的时钟蛋白表达节律的结果，无显着性。观察到变化。未来需要增加点数并进行详细分析。 3.为了缩小UNT的候选范围，我们创建了PDF神经元中神经递质合酶的敲低菌株，并以PDF>TNT为指标，分析了DD+TC下的特征活动节律。结果，在 GABA、乙酰胆碱、多巴胺、组胺、血清素和谷氨酸合酶的敲低菌株中，直到同步为止的循环数延迟至约 5 个循环，表明这些可能包含在 UNT 中。今后，需要使用利用了上述筛选的合成酶的启动子序列的转化体来制作表达GFP的细胞系，并结合PDF免疫染色来进行传递体的鉴定。