転移活性をもつ内在性レトロトランスポゾンのエピジェネティックな制御機構

具有转座活性的内源性逆转录转座子的表观遗传调控机制

基本信息

批准号：
10J03057
负责人：
塚原小百合
金额：
$ 1.34万
依托单位：
National Institute of Genetics (2012)The Graduate University for Advanced Studies (2010-2011)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

项目摘要

シロイヌナズナ近縁種のレトロトランスポゾンTal1は、セントロメア領域特異的に転移する。本年度は、Tal1のセントロメア領域へのターゲッティングに必要な因子を同定することを目的とし、実験を行った。具体的には、Tal1の発現を誘導できるような形質転換体に対して、EMS処理により変異を誘導した後、Tal1の発現を誘導して転移させ、Tal1がセントロメアをターゲッティングできなくなる変異体の選抜を行うことを目的とした。本年度の成果としては、スクリーニングに必要なコンストラクト、および形質転換体の作成までを行った。<コンストラクトの作成>(1)エストロゲン誘導Tal1コード領域EMS処理後にTal1の転移を引き起こすことができるよう、発現誘導可能なTal1コンストラクトを作成した、エストロゲン誘導のベクターにTal1のコード領域(逆転写酵素、インテグレース等転移に必要なタンパクをコードする)をつなぐ。LTR部分は含まないため、この配列自体は転移しない。(2)Tal1 LTR領域Tal1の内部配列(タンパクをコードする領域)を除去し、LTRとその内側数百bpのみを含む。転移に必要なタンパクをコードしないため、この配列だけでは転移できないが、タンパク存在下で転移可能。<形質転換>上記の2種類のコンストラクトについて、それぞれ別々に形質転換を行い、A. thalianaに導入した。このうち1種類については形質転換体を得ることができた。

逆转录转座子 Tal1 是拟南芥的一种密切相关物种，专门转座到着丝粒区域。今年，我们进行了实验，目的是确定 Tal1 靶向着丝粒区域所需的因素。具体来说，我们将通过EMS处理在可以诱导Tal1表达的转化体中诱导突变，然后诱导Tal1表达和转移，并选择Tal1不能靶向着丝粒的突变体。今年的结果包括创建筛选和转化体所需的构建体。 <构建体的创建> (1)雌激素诱导性Tal1编码区为了在EMS治疗后诱导Tal1转移，我们创建了可以诱导表达的Tal1构建体(编码转移所需的蛋白质，例如整合酶)。由于它不包含 LTR 部分，因此该序列本身不会被传输。 (2) Tal1 LTR 区 Tal1 的内部序列（蛋白质编码区）被去除，只包含 LTR 及其内部的数百个 bp。该序列本身并不编码转移所需的蛋白质，因此它不能易位，但在蛋白质存在的情况下是可能的。 <转化> 将上述两种构建体分别转化并导入拟南芥中。我们能够获得其中一种类型的转化体。