細胞内動態制御を可能とするin vivo癌への革新的な核酸送達システムの構築

构建一种创新的体内癌症核酸递送系统，能够控制细胞内动力学

• 批准号: 10J02352
• 负责人: 櫻井 遊
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J02352/
• 关键词: siRNA; リポソーム; がん; DDS; 5' RACE-PCR法; がん治療; ドラッグデリバリーシステム

当該年度では,siRNAの細胞内動態制御技術を用いたがん治療を目的として,in vivoでのsiRNAの作用の確認や,これによる治療効果の評価を行った。昨年度までに生体内環境に応答してsiRNAが細胞内へと移行するカチオン性脂質YSK05を含むMEND(YSK-MEND)の調製しており,今年度は、YSK-MENDに封入するsiRNAを、抑制することで腫瘍細胞に対して殺細胞効果を有する遺伝子であるPLK1に対するsiRNA(si-PLK1)を内封し、担がんマウスに対しての治療効果を評価した。治療用siRNAを内封したMENDを3.0mg/kgで6回静脈内投与を行ったところ、穏やかな腫瘍成長抑制効果が得られたもののその阻害は有意なものではなかった。この成長抑制効果を更に増強するために、PLK1のノックダウンと協調して作用が強まることが知られているドキソルビシンとの同時投与を試みた。ドキソルビシンはリボソームに内封した形で担がんマウスに投与を行い、1.5mg/kgでsiRNA封入MENDと最初の3回まで同時に投与を行った。その結果、ドキソルビシンの同時投与によってより強い抑制効果が観察された。また、アポトーシスが起きた細胞と反応して蛍光を発する試薬を投与することで、腫瘍内のアポトーシスの様子を観察したところ、si-PLK1とドキソルビシンの同時投与によってアポトーシスが強く誘導されていることが明らかとなった.この結果,siRNAにより既存の抗ガン剤の効果を高めるという、併用療法に繋がる結果であると考えている。また、本研究で用いた腎細胞がんは既存の抗ガン剤が奏功しないがん種であることから、この成果は腎細胞がんの新たな治療法の開発に繋がると考えられる。

在这个财政年度，我们确认了siRNA在体内的作用，并评估了这种治疗效果，以便使用siRNA的细胞内动力学治疗癌症。直到去年，制备了含有阳离子脂质YSK05的修补（YSK修订），其中制备了siRNA以响应体内环境转移到细胞中的细胞。今年，对PLK1进行了siRNA（SI-PLK1），该基因通过抑制包裹在YSK-MEND中的siRNA对肿瘤细胞具有杀伤作用的基因，并评估了治疗对癌症小鼠的影响。当在3.0 mg/kg的情况下静脉注射含有治疗性siRNA的修补六次时，获得了轻度的肿瘤生长抑制作用，但抑制作用并不重要。为了进一步增强这种生长抑制作用，我们试图共同辅助阿霉素，众所周知，这与PLK1的敲低相结合。将阿霉素以核糖体中包裹的形式施用给癌症小鼠，并以1.5 mg/kg的形式在siRNA已封装的1.5 mg/kg处施用，直到前三遍。结果，当辅助阿霉素时，观察到更强的抑制作用。此外，当我们通过施用与经历凋亡的细胞反应的试剂观察到肿瘤内凋亡的状况时，揭示了同时施用Si-Plk1和doxorubibicin会强烈诱导凋亡。结果，我们认为这是结合治疗的结果，siRNA增强了现有抗癌剂的有效性。此外，由于本研究中使用的肾细胞癌是一种癌症类型，没有现有抗癌药物的有效性，因此这种结果被认为会导致肾细胞癌的新疗法的发展。

项目成果

Endosomal escape and the knockdown efficiency of liposomal-siRNA by the fusogenic peptide shGALA

• DOI: 10.1016/j.biomaterials.2011.04.047
• 发表时间: 2011-08-01
• 期刊: BIOMATERIALS
• 影响因子: 14
• 作者: Sakurai, Yu;Hatakeyama, Hiroto;Harashima, Hideyoshi
• 通讯作者: Harashima, Hideyoshi

A pH-sensitive cationic lipid facilitates the delivery of liposomal siRNA and gene silencing activity in vitro and in vivo

• DOI: 10.1016/j.jconrel.2012.09.009
• 发表时间: 2012-11-10
• 期刊: JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE
• 影响因子: 10.8
• 作者: Sato, Yusuke;Hatakeyama, Hiroto;Harashima, Hideyoshi
• 通讯作者: Harashima, Hideyoshi

Gene Silencing via RNAi and siRNA Quantification in Tumor Tissue Using MEND, a Liposomal siRNA Delivery System

• DOI: 10.1038/mt.2013.57
• 发表时间: 2013-06-01
• 期刊: MOLECULAR THERAPY
• 影响因子: 12.4
• 作者: Sakurai, Yu;Hatakeyama, Hiroto;Harashima, Hideyoshi
• 通讯作者: Harashima, Hideyoshi

pH応答性カチオン性脂質を用いた腫瘍組織へのsiRNAデリバリーシステムの構築

使用 pH 响应性阳离子脂质构建 siRNA 递送系统至肿瘤组织

• 发表时间: 2012
• 作者: 2. Sato Y;Hatakeyama H;Sakurai Y Hyodo M;Akita H;Harashima H;綾野孝則;櫻井遊;綾野孝則;櫻井遊,畠山浩人,佐藤悠介,兵藤守,秋田英万,原島秀吉
• 通讯作者: 櫻井遊,畠山浩人,佐藤悠介,兵藤守,秋田英万,原島秀吉

エンドソーム脱出素子を搭載したsiRNAデリバリーシステムの開発

开发配备内体逃逸元件的 siRNA 递送系统

• 发表时间: 2010
• 作者: 2. Sato Y;Hatakeyama H;Sakurai Y Hyodo M;Akita H;Harashima H;綾野孝則;櫻井遊;綾野孝則;櫻井遊,畠山浩人,佐藤悠介,兵藤守,秋田英万,原島秀吉;綾野孝則;Sakurai Yu;櫻井遊;綾野孝則;櫻井遊
• 通讯作者: 櫻井遊